PCV2對(duì)體外培養(yǎng)仔豬淋巴細(xì)胞TLR的影響.pdf

1、PCV2是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)的主要病原。自1991年在加拿大首次報(bào)道以來，在世界各地已廣泛傳播，給世界的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。PCV2感染后，可引起仔豬固有免疫和適應(yīng)性免疫的障礙，導(dǎo)致嚴(yán)重的免疫抑制。TLR是近年來回有免疫研究最重要的進(jìn)展，可識(shí)別一種或多種特定病原相關(guān)分子模式(PAMP)，啟動(dòng)針對(duì)入侵病原體的早期應(yīng)答，引起炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，誘發(fā)獲得性免疫反應(yīng)，是連接機(jī)體固有免疫和適應(yīng)性免疫的橋梁。淋巴細(xì)胞是機(jī)體

2、重要的免疫細(xì)胞，也是PCV2作用的主要靶細(xì)胞，我們前期的研究已經(jīng)證實(shí)，PCV2可引起仔豬淋巴細(xì)胞促炎和抗炎細(xì)胞因子表達(dá)和分泌的紊亂，那么這與淋巴細(xì)胞的TLR之間存在何種關(guān)系？有哪些TLR參與PCV2引起機(jī)體的免疫抑制過程？基于此，本試驗(yàn)探討PCV2感染對(duì)體外培養(yǎng)仔豬淋巴細(xì)胞TLR的影響，從而為臨床上圓環(huán)病毒病(PCVD)的防治提供理論基礎(chǔ)。
　　 6頭經(jīng)ELISA和熒光定量PCR方法檢測PCV2和PRRSV血清抗體和抗原均為陰性

3、的30日齡斷奶仔豬，體外培養(yǎng)脾臟細(xì)胞，分為對(duì)照組和PCV2感染組，分別在培養(yǎng)后0、6、12、24和48 h收集懸浮的淋巴細(xì)胞。間接免疫熒光定位檢測PCV2感染淋巴細(xì)胞的情況;提取淋巴細(xì)胞的總RNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9 mRNA表達(dá)量的變化。結(jié)果表明，TLR2 mRNA的表達(dá)量在攻毒后12、24和48 h時(shí)，均極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01); TLR3 mRNA的表

4、達(dá)量在攻毒后24和48 h時(shí)均極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01); TLR4 mRNA的表達(dá)量在攻毒后24 h時(shí)極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01);在48h時(shí)，顯著高于對(duì)照組(P＜0.05); TLR7和TLR8 mRNA表達(dá)量各個(gè)時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組相比，差異均不顯著(P＞0.05); TLR9 mRNA的表達(dá)量在攻毒后12、24和48 h時(shí)，均極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。結(jié)果表明，PCV2可顯著影響體外培養(yǎng)仔豬淋巴細(xì)胞TLR2、TLR3

5、、TLR4和TLR9 mRNA的表達(dá)，而對(duì)TLR7和TLR8mRNA表達(dá)的影響不明顯。
　　 6頭經(jīng)ELISA和熒光定量PCR方法檢測PCV2和PRRSV血清抗體和抗原均為陰性的30日齡斷奶仔豬，體外培養(yǎng)脾臟細(xì)胞，分為對(duì)照組和PCV2感染組，分別在培養(yǎng)后0、6、12、24和48h收集懸浮的淋巴細(xì)胞。提取淋巴細(xì)胞的總蛋白，Western blot定量檢測TLR3和TLR4蛋白含量的變化。結(jié)果，PCV2感染后6和12 h，淋巴細(xì)胞中