幾種環(huán)境因子對(duì)馬氏珠母貝生長(zhǎng)、攝食及Hsp70基因表達(dá)量聯(lián)合效應(yīng)的研究.pdf

1、(1)采用中心復(fù)合設(shè)計(jì)(central composite circumscribed design，CCC)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法研究了溫度、鹽度兩個(gè)環(huán)境因子對(duì)馬氏珠母貝稚貝生長(zhǎng)與存活的影響。采用方差分析(ANOVA)、決定系數(shù)等對(duì)實(shí)驗(yàn)所得回歸方程模型進(jìn)行顯著性及擬合度檢驗(yàn)，同時(shí)采用響應(yīng)曲面分析法及基于響應(yīng)曲面基礎(chǔ)之上的滿意度函數(shù)法確立了生長(zhǎng)與存活的最佳溫度、鹽度組合。以溫度、鹽度兩個(gè)因子為自變量，以馬氏珠母貝稚貝殼高瞬時(shí)生長(zhǎng)率、累積生長(zhǎng)率及存活

2、率為因變量，建立的二次回歸方程模型如下：IGR=-151.4289+3.7791T+7.5142S+0.0079T×S-0.0692T2-0.1294S2AGR=-881.387+18.5432T+46.9178S+0.0532T×S-0.3542T2-0.8145S2SR=-697.191+24.8590T+29.2500S+0.0623T×S-0.4637T2～0.5212S2
　　以上模型決定系數(shù)分別達(dá)到，95.56％、97

3、.67％、94.59％，說(shuō)明瞬時(shí)生長(zhǎng)率、累積生長(zhǎng)率及存活率的回歸方程模型均呈現(xiàn)顯著水平且擬合度較高，能夠真實(shí)的反應(yīng)實(shí)際情況并能用于不同溫度、鹽度組合下生長(zhǎng)與存活的預(yù)測(cè)。在馬氏珠母貝稚貝生長(zhǎng)過(guò)程中以及存活中溫度、鹽度在一定的范圍內(nèi)的互作效應(yīng)不顯著，其中溫度效應(yīng)較為明顯。優(yōu)化結(jié)果顯示最佳溫度、鹽度組合為28.63℃，29.75，在此最優(yōu)條件下模型預(yù)測(cè)的瞬時(shí)生長(zhǎng)率、累積生長(zhǎng)率和存活率分別達(dá)到15.76％d-1、79.35μm.d-1和96.4

4、6％，滿意度98％。
　　(2)采用CCF設(shè)計(jì)和響應(yīng)曲面分析法在實(shí)驗(yàn)室條件下研究了不同的溫度(℃)、鹽度(S)和餌料密度(cells.L-1)組合下對(duì)馬氏珠母貝濾水、攝食率的聯(lián)合影響，確定了馬氏珠母貝最佳生長(zhǎng)溫度、鹽度和餌料密度組合。設(shè)定溫度范圍16-34℃，鹽度范圍20-44，餌料密度范圍0.50×102-3.50×102cells.L-1。建立了溫度、鹽度和餌料密度對(duì)馬氏珠母貝濾水率、攝食率的定量關(guān)系。結(jié)果表明：溫度一次效應(yīng)、

5、二次效應(yīng)對(duì)濾水率影響極顯著(P<0.01)；鹽度一次效應(yīng)對(duì)濾水率影響顯著(P<0.05)；鹽度二次效應(yīng)對(duì)濾水率影響極顯著(P<0.01)；餌料密度一次效應(yīng)對(duì)濾水率影響不顯著(P>0.05)；餌料密度二次效應(yīng)對(duì)濾水率影響極顯著(P<0.01)；溫度和餌料密度對(duì)濾水率的互做效應(yīng)顯著(P<0.05)；溫度和鹽度、鹽度和餌料密度對(duì)濾水率的互做效應(yīng)不顯著(P>0.05)。溫度一次效應(yīng)對(duì)攝食率影響顯著(P<0.05)；溫度二次效應(yīng)對(duì)攝食率影響極顯著

6、(P<0.01)；鹽度一次效應(yīng)、二次效應(yīng)對(duì)攝食率影響極顯著(P<0.011；餌料密度一次效應(yīng)、二次效應(yīng)對(duì)攝食率影響極顯著(P<0.01)；溫度和餌料密度對(duì)攝食率的互作效應(yīng)顯著(P<0.05)；溫度和鹽度、鹽度和餌料密度對(duì)攝食率的互作效應(yīng)不顯著(P>0.05)。利用響應(yīng)曲面法對(duì)濾水率和攝食率同時(shí)優(yōu)化，得到在適宜的溫度、鹽度和餌料密度范圍內(nèi)兩個(gè)響應(yīng)變量呈峰值變化，在溫度28.61℃，鹽度31.18，餌料密度27.36×10cells.L-1

7、時(shí)，濾水率13.46×10-2L.h-1，攝食率15.77×106cells.h-1同時(shí)達(dá)到最大值，滿意度達(dá)到86％。對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行二次多元回歸擬合，根據(jù)實(shí)際值得到濾水率、攝食率對(duì)溫度、鹽度和餌料密度的二次多項(xiàng)回歸方程如下：
　　CR=407.2457+13.9660T+16.3580S+11.4731A+0.0331T×S+0.0705T×A+0.0179S×A-0.2958T2-0.2851S2-0.3503A2
　　F

8、R=-36.0771+1.5008T+1.0601S+1.4321A-0.0017T×S+0.0059T×A-0.0026S×A-0.0287T2-0.0173S2-0.0316A2
　　濾水率模型的決定系數(shù)99.56％，攝食率模型的決定系數(shù)99.53％，表明模型的擬合度極高，可用于預(yù)測(cè)濾水率和攝食率的最優(yōu)值，研究結(jié)果為馬氏珠母貝人工養(yǎng)殖提供理論基礎(chǔ)。
　　(3)采用復(fù)合設(shè)計(jì)和響應(yīng)曲面分析法在實(shí)驗(yàn)室條件下研究了不同溫度(℃)

9、、鹽度(S)組合下對(duì)馬氏珠母貝(P.martensii)鰓、閉殼肌、外套膜Hsp70基因表達(dá)量的聯(lián)合效應(yīng)并建立了模型。采用方差分析(ANOVA)和決定系數(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)所得回歸方程模型進(jìn)行顯著性及擬合度檢驗(yàn)。設(shè)定溫度范圍16-40℃，鹽度范圍10-50。結(jié)果表明：溫度的一次效應(yīng)對(duì)鰓、閉殼肌、外套膜Hsp70基因表達(dá)量影響顯著(P<0.05)，鹽度的一次效應(yīng)對(duì)鰓、閉殼肌、外套膜Hsp70基因表達(dá)量無(wú)顯著影響(P>0.05)；溫度、鹽度二次效應(yīng)對(duì)鰓

10、、閉殼肌、外套膜Hsp70基因表達(dá)量影響顯著(P<0.05)，溫度、鹽度之間的互作效應(yīng)對(duì)鰓、閉殼肌、外套膜Hsp70基因表達(dá)量無(wú)顯著影響(P>0.05)。采用響應(yīng)曲面法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果優(yōu)化，得到在適宜的溫度、鹽度范圍內(nèi)兩個(gè)響應(yīng)變量呈峰值變化，在溫度26.78℃、鹽度29.33時(shí)，Hsp70表達(dá)量在鰓、閉殼肌、外套膜中分別達(dá)到最小值0.5276、0.9821、0.9499，滿意度達(dá)到98％。以溫度、鹽度兩個(gè)因子為自變量，以馬氏珠母貝鰓、閉殼肌、

11、外套膜Hsp70表達(dá)量為因變量，建立的Hsp70基因表達(dá)量的二次回歸方程模型為：
　　GHsp70=3.0957-0.1269T-0.0592S-0.0001T×S+0.0024T2+0.0011S2
　　AHsp70=3.0398-0.0910T-0.0454S+0.0001T×S+0.0014T2+0.0006S2
　　MHSP70=2.5830-0.0738T-0.0362S+1.04T×S+0.0013T2+0