基于SSR分子標(biāo)記技術(shù)鑒定甜菜種質(zhì)資源.pdf

1、本文通過(guò)對(duì)123對(duì) SSR引物篩選、SSR體系優(yōu)化和57份甜菜材料的鑒定，以期建立穩(wěn)定、精確、經(jīng)濟(jì)和快捷的甜菜種質(zhì)資源 SSR分子標(biāo)記鑒定體系，并對(duì)57份供試甜菜材料進(jìn)行了評(píng)價(jià)，為甜菜種質(zhì)資源鑒定和有效利用提供了科學(xué)方法和理論依據(jù)。主要結(jié)果如下：
　　1優(yōu)化了甜菜 SSR分子標(biāo)記技術(shù)體系。比較了模板 DNA、正反引物、Mg2+、dNTPs、Taq酶濃度，退火溫度和銀染技術(shù)對(duì) PCR擴(kuò)增反應(yīng)的影響，建立了適用于甜菜種質(zhì)資源鑒定的PC

2、R反應(yīng)體系。PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系的體積是20μL：Mg2+25.0 mM選擇2.0μL,10×buffer體積2.5μL，dNTPs（2.5 mM）2.0μL，Taq酶（2.5 U/μL）0.10μL，SSR正反引物（100μM）各1.0μL，模板 DNA（30 ng/ul）體積2.0μL，無(wú)菌水9.40μL。 PCR反應(yīng)程序是：PCR擴(kuò)增前94℃預(yù)變性5分鐘，35個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)在94℃變性0.5分鐘，溫度50-52℃（根據(jù)引物定）退火

3、1分鐘，72℃延伸0.5分鐘。銀染技術(shù)：10％乙醇、0.5%乙酸和0.2%硝酸銀中染色5分鐘。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在6%聚丙烯酰胺凝膠上分離。從123對(duì)甜菜 SSR引物中篩選出10對(duì)應(yīng)用于本試驗(yàn)供試材料的鑒定引物，并從10對(duì)引物中確定了2對(duì)最適引物。
　　22對(duì)引物在57份供試材料中共檢測(cè)到30個(gè)等位基因變異，每對(duì)引物能夠檢測(cè)出18和12個(gè)等位基因變異，平均檢測(cè)數(shù)為15個(gè)；PIC值0.86和0.89，平均為0.875。57份甜菜供試材料