轉(zhuǎn)MvP5CS和MvNHX1基因提高棉花抗旱性的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以轉(zhuǎn)基因技術(shù)為基礎(chǔ),利用花粉管通道法將抗逆相關(guān)基因MvP5CS和MvNHX1轉(zhuǎn)化到棉花中,在T1、T2、T3中代通過(guò)卡那霉素篩選抗性植株,并結(jié)合分子檢測(cè)鑒定陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因植株,將其進(jìn)行擴(kuò)繁,對(duì)轉(zhuǎn)基因棉花植株進(jìn)行DNA水平、生理生化水平和RNA水平的檢測(cè)分析,研究MvP5CS和MvNHX1在棉花中的整合和表達(dá)情況,并以非轉(zhuǎn)基因棉花為對(duì)照,綜合分析轉(zhuǎn)基因棉花的抗旱性。
　　主要結(jié)論如下:
　　1、選取健康的棉花植株,將pBI1

2、21-MvNHX1和pCAMBIA2300-MvP5CS兩種質(zhì)粒通過(guò)花粉管通道法轉(zhuǎn)入棉花中?？股睾头肿訖z測(cè)進(jìn)行篩選并對(duì)陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行擴(kuò)繁。
　　2、Southern雜交技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示T3代轉(zhuǎn)基因棉花中的MvNHX1基因和MvP5CS基因已單拷貝插入到棉花基因組中。
　　3、利用RT-PCR法檢測(cè)MvP5CS基因和MvNHX1基因在轉(zhuǎn)基因棉花中的表達(dá)情況。
　　4、利用不同時(shí)間的干旱對(duì)轉(zhuǎn)MvNHX1、MvP5CS

3、基因棉花植株和對(duì)照植株在苗期進(jìn)行脅迫,測(cè)定其脯氨酸、丙二醛、葉綠素、過(guò)氧化物酶(POD)活性、超氧物歧化酶(SOD)活性、過(guò)氧化氫酶(CAT)等相關(guān)含量和指標(biāo)。
　　5、轉(zhuǎn)MvNHX1、MvP5CS基因棉花植株和對(duì)照植株進(jìn)行經(jīng)過(guò)不同時(shí)間的干旱脅迫后,測(cè)定轉(zhuǎn)MvNHX1、MvP5CS基因棉花植株和非轉(zhuǎn)基因棉花植株在生物量上的區(qū)別。
　　經(jīng)分子檢測(cè)證實(shí)MvNHX1和MvP5CS基因已成功轉(zhuǎn)入棉花基因組中。對(duì)T3代轉(zhuǎn)基因棉花的RT