家蠶黃體色突變體Iem體表色素SP的分離純化與鑒定.pdf

1、墨蝶呤(sepiapterin，SP)是一種黃色的蝶呤類化合物，屬于蝶啶的衍生物。研究表明SP在生物的細(xì)胞代謝過(guò)程中有著重要的輔助作用，它是形成昆蟲體色的主要內(nèi)源性色素之一，也是GTP分解代謝通路中的代謝中間體。對(duì)于哺乳動(dòng)物而言，SP則是補(bǔ)救途徑合成四氫生物蝶呤(tetrahydrabiopterin，BH4)的前體物質(zhì)，而BH4是芳香族氨基酸單氧化酶如色氨酸羥化酶、酪氨酸羥化酶和苯丙氨酸羥化酶的重要輔酶，也是一氧化氮合酶(NOS)的重

2、要輔助因子，BH4的合成障礙會(huì)導(dǎo)致多種生理代謝疾病或神經(jīng)性代謝綜合癥。大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究證明，口服BH4對(duì)因BH4缺乏而導(dǎo)致的疾病有明顯的治療效果。SP作為補(bǔ)救通路中合成BH4的底物，補(bǔ)充SP對(duì)某些疾病也有良好的治療效果。
　　 lem蠶(lemon，lem)是家蠶的一種黃體色突變體，其體內(nèi)由于缺乏SP還原酶而使幼蟲體表富含SP色素，是獲取SP的寶貴生物資源。本研究以從lem蠶體表分離純化天然SP，從而把提純的SP進(jìn)一步應(yīng)用

3、于BH4的體外合成為目標(biāo)，對(duì)SP的提取純化條件進(jìn)行篩選和優(yōu)化，建立了一套行之有效的實(shí)驗(yàn)體系。
　　 本實(shí)驗(yàn)采用溶劑浸提法從lem蠶體表提取SP，利用柱層析對(duì)SP進(jìn)行分離純化，通過(guò)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)體系，獲得了提取與純化SP的最佳工藝條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在以50％乙醇作為浸提溶劑，料液比為1:20的條件下可獲得較高的色素提取率；以ECTEOLA纖維素柱為色素分離柱、以水-0.01％乙酸梯度洗脫分離柱，能夠有效的將SP與其他色素分開；以sep

4、hadexG-25-150柱和phosphate纖維素柱為色素純化柱，以純水為純化柱的流動(dòng)相，取得了良好的純化效果，經(jīng)此實(shí)驗(yàn)體系獲得的SP純度較高。本實(shí)驗(yàn)利用紙色譜法、紫外可見吸收光譜法和高效液相色譜法對(duì)SP進(jìn)行了定性和定量分析。
　　 同時(shí)，利用高效液相色譜法對(duì)所提取的SP進(jìn)行了定性定量分析。色譜條件為：用ODSC18色譜柱(250mm×4.6mm，5um)，以超純水-99.9％甲醇-99.9％冰乙酸(體積比為79.5:20:

5、0.5)為流動(dòng)相，流速為1ml/min，柱溫為25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為420nm。該方法操作靈敏度高、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可有效的對(duì)SP進(jìn)行鑒定和分析。
　　 目前市售的SP和BH4主要通過(guò)化工有機(jī)合成，價(jià)格十分昂貴。相比之下，本研究所建立的實(shí)驗(yàn)體系具有成本低廉、工序簡(jiǎn)單、產(chǎn)量可觀等明顯優(yōu)勢(shì)。SP的提取量可達(dá)46.8ug/g蠶體壁，研究成果為今后從lem蠶體大規(guī)模工業(yè)化純化回收天然SP，進(jìn)而通過(guò)體外合成的途徑制備BH4的應(yīng)用研究奠定