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1、小麥?zhǔn)鞘澜缟献钪匾募Z食作物之一。小麥花藥特異性PSG076基因在花粉發(fā)育過(guò)程中表達(dá),但目前其功能仍然未知。對(duì)PSG076啟動(dòng)子的研究將有助于了解該基因在小麥有性生殖過(guò)程中的作用。
本研究在已獲得的小麥花藥特異性啟動(dòng)子PSG076的基礎(chǔ)上,采用PCR技術(shù)克隆出0.4~2.4 kb的不同長(zhǎng)度的啟動(dòng)子片段,連接T載體后導(dǎo)入大腸桿菌。然后將包含有啟動(dòng)子片段和gus基因的融合基因插入質(zhì)粒pBI121中,完成載體的構(gòu)建并將其導(dǎo)入農(nóng)桿菌中
2、。最終利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法將該融合片段導(dǎo)入煙草,獲得轉(zhuǎn)基因植株。
在獲得轉(zhuǎn)基因煙草后,提取全基因組DNA,根據(jù)gus基因和不同啟動(dòng)子片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增,確定外源基因是否成功插入煙草基因組中。之后利用GUS組織化學(xué)染色對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草不同組織進(jìn)行檢測(cè),驗(yàn)證了PSG076啟動(dòng)子的花粉特異性,并發(fā)現(xiàn)其最小功能片段可能為900 bp。
本研究將有助于深入分析PSG076基因及其啟動(dòng)子,為構(gòu)建小麥雄性不育系打下良好基礎(chǔ),具有潛在的
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