抗阿特拉津功能基因trzN在水稻中的轉(zhuǎn)化和抗性研究.pdf

1、阿特拉津作為一種低毒、廣譜、高效的除草劑，對(duì)一年、多年生植物具有較強(qiáng)的除殺能力，是除草劑中的重要品種，被廣泛使用。但噴施除草劑阿特拉津，在殺死雜草的同時(shí)也將農(nóng)作物非選擇性的除殺，給農(nóng)民造成不必要的損失。利用基因工程方法培育抗除草劑轉(zhuǎn)基因作物可以方便、快捷的解決這一難題。
　　 本研究利用重疊延伸PCR方法，在不改變氨基酸序列的前提下，將阿特拉津脫氯水解酶基因trzN的兩個(gè)堿基位點(diǎn)定點(diǎn)突變，以去除基因序列內(nèi)部的兩個(gè)酶切位點(diǎn): Ba

2、mHⅠ酶切位點(diǎn)GGATCC改為GTATCC，KpnⅠ酶切位點(diǎn)GGTACC改為AGTACC，同時(shí)在目的基因的5'端和3'端兩端分別加上BamHⅠ和KpnⅠ酶切位點(diǎn)。
　　 改造好的目的基因與植物表達(dá)載體pVec-8Ubi連接，構(gòu)建水稻過(guò)表達(dá)載體pVec-trzN。用農(nóng)桿菌接介導(dǎo)法，將阿特拉津脫氯水解酶基因trzN導(dǎo)入到水稻粳稻品種日本晴（Oryza sativa L.cv.Nipponbare）中，經(jīng)潮霉素抗性篩選得到54株再生幼

3、苗，提取54株T(0)代轉(zhuǎn)基因植株葉片的DNA，進(jìn)行PCR驗(yàn)證。選取三株陽(yáng)性植株提取總RNA，進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，所選取的3株轉(zhuǎn)基因水稻均擴(kuò)增出目的條帶，表明trzN基因已成功轉(zhuǎn)入水稻日本晴中。
　　 用水、1g/L助劑和0.0004g/L、0.004g/L、0.04g/L、0.4g/L、4g/L不同濃度阿特拉津處理日本晴水稻的萌發(fā)種子，結(jié)果顯示:高于0.04g/L的阿特拉津可致使水稻葉片變黃甚至枯委，而0.0004g/L的阿