廣東省規(guī)?；i場豬圓環(huán)病毒感染情況及分子特征研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒分為豬圓環(huán)病毒1型(PCV1)和豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)兩種類型，近年來的研究發(fā)現PCV2與一系列豬的綜合征有關。PCV2由于引起PCVAD而受到廣泛關注，而PCV1在豬群中的感染情況近年來很少有人研究。
　　 為了解廣東省豬圓環(huán)病毒的最新流行情況和廣東省病豬群PCV2的感染情況及其與PRRSV的相關性，本研究采集了廣東省11個規(guī)模豬場各飼養(yǎng)階段豬血清807份，用套式PCR(nPCR)檢測PCV1利PCV2；采集了若

2、干豬場2010年1月至2012年2月間有咳嗽，喘氣，消瘦及疑似PDNS等臨床癥狀的豬血清312份和來自實驗室豬病門診疑似PCVAD的病豬血清樣品343份(以下稱病豬)，以及無臨床癥狀豬血清104份(以下稱健康豬)，以nPCR檢測PCV2，以一步法反轉錄PCR(RT-PCR)檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)。結果發(fā)現所調查的11個規(guī)模豬場中只有5個檢出PCV1，所有豬場均檢出PCV2。PCV2陽性率為30.61％，而PCV1陽性率

3、僅為4.21％；經產母豬和7周齡以上保育豬PCV陽性率最高；病豬血清PCV2陽性率為59.1％，PRRSV陽性率為43.8％，PCV2陽性豬群中有41.6％的豬同時感染PRRSV；病豬群10～12月的PCV2感染率最高，而1～3月最低；健康豬血清PCV2陽性率為37.5％，PRRSV陽性率為3.29％，PCV2與PRRSV無混合感染。證明PCV尤其是PCV2在華南地區(qū)仍廣泛傳播并流行，而且PCV2與PRRSV混合感染致病情況較多。PCV

4、2的感染率與季節(jié)有一定的相關性，種豬帶毒情況嚴重。
　　 為了解疫苗免疫與否對豬只抗體水平的影響，初步評估疫苗免疫的效果及保護力，了解免疫斤PCV2抗體的消長規(guī)律及免疫壓力下PCV2的變異情況，本研究按生長階段不同采集免疫PCV2疫苗豬場(免疫場)和不免疫PCV2疫苗豬場(非免疫場)的豬全血樣本798份進行PCV2抗體和抗原檢測，對部分陽性樣品擴增全基因序列進行序列分析。凋查發(fā)現免疫場公豬PCV2抗體陽性率達到100％，經產母豬

5、PCV2抗體陽性率達到98.5％，而非免疫場公豬抗體陽性率為75％，經產母豬抗體陽性率達到91.3％，免疫場抗體陽性率高于非免疫場，說明進行PCV2疫苗免疫可以提高豬場PCV2的抗體水平。病毒檢測結果發(fā)現免疫場經產母豬PCV2陽性率僅為8.46％，而非免疫場經產母豬PCV2陽性率達到24.3％，說明疫苗免疫對降低PCV2的感染率有一定的效果。分別對比經產母豬，公豬和后備母豬的抗體和病毒感染情況發(fā)現二者并不相符，三者抗體陽性率均遠遠高于病

6、毒感染率，證明對經產母豬，公豬和后備母豬的PCV2抗體情況調查并不能說明PCV2的感染情況。仔豬PCV2抗體和病毒感染情況隨著周齡的升高呈現出規(guī)律性的變化，其中抗體有兩個高峰，即1～3周齡和6～10周齡，病毒感染率在6周齡之后呈升高趨勢。免疫場仔豬PCV2感染率明顯低于非免疫場的感染率，說明母豬免疫對仔豬有一定的保護作用。對免疫場和非免疫場PCV2全基因序列分析發(fā)現他們與法國(AF055393)和加拿大(DQ220730)的毒株序列相比

7、具有較高的同源性，最高分別達到98.6％和98.5％，本研究分離到的毒株與國內毒株具有較近的親緣關系，免疫豬場毒株序列有所變化。
　　 現有PCR方法只能檢測到PCV2的存在而不能區(qū)分基因亞型。傳統分型方法須經測序和序列比對，過程繁瑣，成本較高。本文根據PCV2a和PCV2b的序列特點，設計合成了3條引物，建立起了區(qū)分PCV2a和PCV2b基因型的PCR方法。試驗結果表明該方法敏感性、特異性較強，適合用于PCV2基因亞型的檢測。

8、同時，本研究利用該PCR方法對廣東省多家規(guī)?；i場的豬血清樣本進行了檢測，結果發(fā)現PCV2在廣東省健康豬群中的感染率為31.5％，在病豬群中的感染率達到42.1％，其中PCV2b成為主要的基因型，PCV2a僅存在少量感染，存在同一頭豬同時感染PCV2a和PCV2b的情況。說明PCV2b已經成為廣東省的流行毒株。
　　 為了解廣東地區(qū)PCV2的流行毒株及其變異情況，從2010年～2012年廣東省23份疑似PCVAD病豬血清中分離P

9、CV2病毒，用PCR和間接免疫熒光方法對這些毒株進行檢測，并以PCR方法擴增得到其全基因序列進行序列分析。結果發(fā)現分離得到了23株PCV2流行毒株，其中有2株1766bp的毒株，其他均為1767bp的毒株。這些毒株與GenBank中其他PCV2全基因序列的同源性在94.2％-99％之間，毒株間同源性在94.5％-99％之間。對其基因組特征以及毒株之間的親緣關系進行分析發(fā)現廣東分離株與國內流行毒株之間的親緣關系密切，但也存在一定的差異。同