亞急性瘤胃酸中毒對(duì)山羊血液皮質(zhì)醇濃度和肝臟脂代謝的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、反芻動(dòng)物（如牛、羊等）采食高谷物日糧極易誘發(fā)亞急性瘤胃酸中毒(Subacuteruminalacidosis，SARA)，該病是現(xiàn)代奶牛養(yǎng)殖業(yè)中的一種多發(fā)性代謝疾病，嚴(yán)重影響奶牛健康和泌乳性能。SARA的臨床癥狀提示反芻動(dòng)物處于一種應(yīng)激狀態(tài)，但關(guān)于動(dòng)物患SARA時(shí)應(yīng)激軸:下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)（Hypothalamus-pituitary-adrenalgland，HPA）活性狀態(tài)的報(bào)道卻很少。因此，本文探索了高精料日糧誘導(dǎo)干奶期和泌

2、乳期奶山羊SARA時(shí)血液、瘤胃液中皮質(zhì)醇濃度及應(yīng)激軸相關(guān)基因與蛋白質(zhì)的表達(dá)變化;并檢測(cè)泌乳期奶山羊在SARA狀態(tài)下時(shí)肝臟脂代謝及其關(guān)鍵基因的表達(dá)變化，從肝臟代謝角度初步揭示SARA引起乳脂率降低的原因。
　　1.SARA對(duì)干奶期山羊HPA軸活性的影響
　　試驗(yàn)選用干奶期波雜二代山羊12只，隨機(jī)分為對(duì)照組（精粗比4∶6）和SARA組（精粗比6∶4），試驗(yàn)期21天。定期采集瘤胃液、血液、肝臟等樣品，pH計(jì)迅速測(cè)定瘤胃pH值，并用

3、放射免疫分析（Radioimmunoassay,RIA）法檢測(cè)血液和瘤胃液中皮質(zhì)醇含量;生化分析法測(cè)定血清中總膽固醇(Totalcholesterol，TCH)含量;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)HPA軸中與皮質(zhì)醇合成相關(guān)的基因表達(dá)，以及皮質(zhì)醇受體的組織分布等;免疫印記(Westernblot，WB)方法檢測(cè)腎上腺3β-類固醇脫氫酶（3β-hydroxysteroiddehydrogenase，3β-HSD）和細(xì)胞色素P45017a-羥化酶(

4、17a-hydroxylasecytochromeP450，P45017a)，及各組織糖皮質(zhì)激素受體(Glucocorticoidreceptors，GR)基因表達(dá)。
　　結(jié)果:高精料（精粗比6∶4）日糧飼喂山羊3周后成功誘導(dǎo)SARA（SARA組）模型。SARA組山羊采食后瘤胃液pH值小于5.8且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)4h，而飼喂低精料比例日糧組山羊（精粗比為4∶6，對(duì)照組）瘤胃液pH值均高于6.0。與對(duì)照組相比，SARA組山羊外周血皮質(zhì)醇

5、濃度無(wú)顯著變化（P＞0.05），但肝靜脈和門靜脈中皮質(zhì)醇濃度均顯著升高（P＜0.05）。SARA組山羊血液膽固醇濃度極顯著低于對(duì)照組(P＜0.01)。Real-timePCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，SARA組山羊下丘腦促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（Corticotropinreleasinghormone，CRH）和垂體阿片促黑素細(xì)胞皮質(zhì)素原（Proopiomelanocortin，POMC）mRNA表達(dá)顯著降低(P＜0.05)，垂體促腎上

6、腺皮質(zhì)激素釋放激素受體（Corticotropinreleasinghormonereceptor,CRHR）mRNA有升高趨勢(shì)（P=0.07）;腎上腺皮質(zhì)中黑素皮質(zhì)素受體2（Melanocortintype2receptor,MC2R）、類固醇合成急性調(diào)節(jié)蛋白（Steroidogenicacuteregulatoryprotein，StAR）和細(xì)胞色素P45011β-羥化酶(11β-hydroxylasecytochromeP450，

7、P45011β)mRNA表達(dá)顯著降低（P＜0.05）;腎上腺皮質(zhì)3β-HSD和細(xì)胞色素P450膽固醇側(cè)鏈裂解酶(Cholesterolside-chaincleavage，P450scc)mRNA表達(dá)分別顯著（P＜0.05）和極顯著（P＜0.01）升高。Westernblot結(jié)果顯示，SARA組腎上腺皮質(zhì)3β-HSD和P450scc蛋白表達(dá)分別升高58.6％和39.4％，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著水平(P＞0.05)。與對(duì)照組比較，SARA組山

8、羊肝臟GRmRNA表達(dá)顯著下調(diào)(P＜0.05），下丘腦GR基因表達(dá)有下降趨勢(shì)（P=0.07），瘤胃上皮組織中GR表達(dá)極顯著升高（P＜0.01），但在海馬和垂體中的表達(dá)無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。以上結(jié)果提示，高精料誘導(dǎo)山羊患SARA時(shí)HPA軸被激活，使機(jī)體處于一定的應(yīng)激狀態(tài)。外周組織中GR基因表達(dá)的變化提示，SARA時(shí)HPA軸的激活可能參與機(jī)體代謝，尤其是肝臟和瘤胃上皮物質(zhì)代謝的改變。
　　2.SARA對(duì)泌乳中期山羊皮質(zhì)醇及乳脂

9、生成的影響
　　此部分試驗(yàn)旨在觀察短期或長(zhǎng)期飼喂高精料日糧對(duì)泌乳期奶山羊皮質(zhì)醇濃度以及肝臟脂代謝的影響。
　　1)短期試驗(yàn):選擇7只裝有永久性瘤胃瘺管的泌乳中期本地山羊，2×2拉丁方設(shè)計(jì)，分別飼喂精粗比為6∶4（SARA組）和4∶6（對(duì)照組）的飼料，試驗(yàn)分兩期，每期14d。采集瘤胃液并測(cè)定pH值;RIA法檢測(cè)血液和瘤胃液中皮質(zhì)醇含量;Realtime-PCR方法檢測(cè)肝臟GRmRNA表達(dá)量。
　　結(jié)果:飼喂高精料比例(6