利用組織培養(yǎng)技術(shù)繁育桑樹(shù)無(wú)毒苗.pdf

1、桑花葉型萎縮病是危害桑樹(shù)的主要病害之一,其病原物為一種類(lèi)似類(lèi)病毒(viroid)的小RNA。該病的發(fā)生與傳播,對(duì)桑葉生產(chǎn)及桑樹(shù)資源的保存利用等造成重大影響。而以嫁接等傳統(tǒng)方法進(jìn)行繁殖桑苗,很難杜絕該病的傳染與擴(kuò)散。
　　利用組織培養(yǎng)的方法繁育無(wú)菌苗及對(duì)染病植株脫毒,在一些花卉及木本植物中已經(jīng)成功運(yùn)用。建立桑樹(shù)組織培養(yǎng)、脫毒及病毒分子檢測(cè)體系,對(duì)蠶桑生產(chǎn)及桑樹(shù)資源的保存利用具有重大意義。
　　本文首先利用植物組織培養(yǎng)的方法,以

2、桑品種育71-1為材料,開(kāi)展了桑樹(shù)無(wú)菌苗繁育體系的研究:通過(guò)正交試驗(yàn)及比較外植體生長(zhǎng)狀況,對(duì)啟動(dòng)培養(yǎng)基中的植物激素的添加濃度進(jìn)行優(yōu)化,并進(jìn)一步篩選出最適桑芽生長(zhǎng)的培養(yǎng)基配方為MS+0.5mg/L2,4-D+1.5mg/L6-BA+1.0mg/LKT+0.1％PVP,最適桑苗生根的培養(yǎng)基配方為1/2MS+0.25mg/L2,4-D+0.1%PVP。
　　為檢測(cè)組培脫毒效果,用2對(duì)桑花葉萎縮病類(lèi)病毒的核苷酸序列檢測(cè)引物,分別對(duì)組培桑苗

3、葉片和相同品種染病對(duì)照葉片的RNA進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增,結(jié)果只在對(duì)照組檢測(cè)到?；ㄈ~萎縮病類(lèi)病毒350bp左右的特異條帶,而在所有組培樣品中均沒(méi)有檢測(cè)到桑花葉萎縮病類(lèi)病毒特異條帶,初步證明本研究建立的組織培養(yǎng)脫毒體系具有一定效果,為生產(chǎn)批量的無(wú)菌脫毒苗奠定了基礎(chǔ)。
　　在成功建立育71-1無(wú)菌苗繁育體系的基礎(chǔ)上,以不同桑樹(shù)品種感染?；ㄈ~型萎縮病的植株莖尖為外植體,進(jìn)行組織培養(yǎng)繁育脫毒苗試驗(yàn)。其中育71-1、湖桑197號(hào)和湖桑199號(hào)