紫外及甲基磺酸乙酯誘變選育竹紅菌甲素高產(chǎn)菌株的研究.pdf

1、竹黃菌(Shiraia bambusicola P. Hennigs)是一種稀有的寄生性藥用真菌,其子實體是傳統(tǒng)的中藥-竹黃資源,近期研究發(fā)現(xiàn)竹黃苝醌類有效成分-竹紅菌素具有抗炎、抗菌、鎮(zhèn)痛、局麻及抗腫瘤的作用,而且已成為抗菌和抗腫瘤的臨床光療藥物。但由于野生竹黃采收期短、產(chǎn)量低,竹紅菌素、竹黃多糖及其他活性成分的研究和生產(chǎn)都受到了極大的限制。為了綜合開發(fā)利用竹黃菌,本文開展了竹黃菌的無性系培養(yǎng),并通過物理(紫外線)和化學(甲基磺酸乙酯

2、)處理技術(shù),對竹黃菌開展誘變育種研究,以期選育得到遺傳穩(wěn)定的竹紅菌甲素高產(chǎn)菌株,為竹黃菌的生物技術(shù)生產(chǎn)和竹紅菌素藥物資源的開發(fā)提供技術(shù)和參考,同時竹黃菌的生物技術(shù)培養(yǎng)也有利于對野生竹黃菌的資源保護。
　　本研究首先開展了竹黃菌Shiraia sp. S8菌株培養(yǎng)、菌絲中竹紅菌甲素的提取分離和竹黃菌的液體發(fā)酵培養(yǎng),通過篩選和優(yōu)化了竹黃菌產(chǎn)竹紅菌素培養(yǎng)基碳源、氮源及不同培養(yǎng)時間、起始pH值及裝液量條件,篩選出優(yōu)化的培養(yǎng)基和發(fā)酵條件,培

3、養(yǎng)基為馬鈴薯20％,葡萄糖2%,KH2PO40.3%,MgSO40.15%,維生素B10.001%,酵母膏0.5%。最佳發(fā)酵條件為:起始pH值為6.0,裝液量200 mL/500 mL,并在培養(yǎng)10 d后收獲竹黃菌菌絲體。
　　其次開展了竹黃菌Shiraia sp. S8菌株的原生質(zhì)體形成條件的研究,探索出竹黃菌原生質(zhì)體形成的最適條件:液體培養(yǎng)菌絲體菌齡50 h,5 mg/mL纖維素酶和10 mg/mL蝸牛酶(終濃度)混合酶系,酶

4、解時間2 h,酶解溫度30℃。在此條件下原生質(zhì)體產(chǎn)量可以達到3.24×106個/mL,再生率可以達到3.5%。
　　竹黃菌Shiraia sp. S8菌株原生質(zhì)體經(jīng)紫外線(距離15 W紫外燈30 cm處)照射處理0.5-2 min,原生質(zhì)體再生后經(jīng)篩選得到一株竹紅菌甲素高產(chǎn)誘變菌株C6,其遺傳穩(wěn)定性良好,產(chǎn)量與S8菌株相比提高53.7%,達到28.1 mg/L。
　　本研究以S8菌株為出發(fā)菌株,用0.5-2.5%甲基磺酸乙酯