遲緩愛德華菌外膜蛋白的蛋白組學(xué)分析.pdf

1、遲緩愛德華菌是水產(chǎn)動物的主要致病菌，可導(dǎo)致多種淡水魚和海洋魚出現(xiàn)全身性出血性敗血、皮膚腫脹腐爛、臟器的壞死等病征，造成大批量死亡，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究試圖發(fā)現(xiàn)遲緩愛德華菌的共同抗原，為遲緩愛德華亞單位疫苗的研發(fā)提供條件。
　　首先，本研究采用Sarkosyl法提取遲緩愛德華菌ET-202的外膜蛋白，利用雙向電泳技術(shù)得到其外膜蛋白圖譜，切取143個蛋白點進(jìn)行質(zhì)譜分析，共檢測到66個蛋白點。通過Swiss.Prot在

2、線數(shù)據(jù)庫對這些蛋白點進(jìn)行功能分析和亞細(xì)胞定位。從中發(fā)現(xiàn)5個與毒力相關(guān)的蛋白分別定位在分泌系統(tǒng)、細(xì)胞膜和外周胞質(zhì)，12個與運輸相關(guān)的外膜蛋白定位在細(xì)胞外膜，3個與抗菌素耐藥性有關(guān)的蛋白定位在細(xì)胞內(nèi)膜；并發(fā)現(xiàn)定位在細(xì)胞質(zhì)中的一些與核酸、氨基酸、蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂類等代謝有關(guān)的蛋白。為遲緩愛德華菌的致病機(jī)制的研究提供了參考。
　　其次，為了找出不同來源菌株之間的共同抗原，用本實驗室已制備的4種針對不同來源遲緩愛德華菌外膜蛋白的牙鲆抗

3、血清對遲緩愛德華菌ET-202的OMPs2DE膠進(jìn)行Western-blotting分析發(fā)現(xiàn)在50kDa-36kDa處有4個能被4種抗血清識別的蛋白，而對照組也出現(xiàn)這四個免疫反應(yīng)點。為了進(jìn)一步驗證，我們又采集真鯛血清、石斑魚血清和不同來源牙鲆血清進(jìn)行Western-blotting分析，結(jié)果顯示這些血清均可識別ET-202 OMPs50kDa-36kDa處的這四個蛋白。推測未免疫魚受易感病原菌的侵染，而病原菌的抗原蛋白可能存在共同的抗原

4、表位。
　　為了進(jìn)一步研究不同病原菌的共同抗原。本實驗利用雙向電泳、Western-blotting和質(zhì)譜技術(shù)對遲緩愛德華菌、嗜水氣單胞菌、創(chuàng)傷弧菌和溶藻弧菌四種菌的外膜蛋白進(jìn)行蛋白組學(xué)分析。四種菌的1D SDS-PAGE圖顯示在50kDa-36kDa之間有相似的條帶，利用雙向電泳技術(shù)的到其外膜蛋白的2DE圖譜，并通過Western-blotting驗證，其50kDa-36kDa之間均有能被同種抗血清共同識別的蛋白點，而同時未免疫