ITS,rbcL和matK序列作為中藥雞骨草條形碼的研究.pdf

1、目的:對(duì)不同來源的雞骨草及其習(xí)用品毛雞骨草的ITS（內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)）序列，rbcL序列（1，5-二磷酸核酮糖羧化酶的大亞基基因），matK序列(葉綠體賴氨酸基因(trnK)的內(nèi)含子）進(jìn)行序列測(cè)定以及對(duì)比分析，探討不同來源的同種植物在序列遺傳上的差異，同時(shí)對(duì)比不同植物（尤其是中藥雞骨草和其偽品）的堿基排列順序的差異，為建立中藥雞骨草的DNA條形碼奠定基礎(chǔ)，并為分子水平鑒定物種（中草藥）提供參考依據(jù)。
　　 方法:(1)利用改良的CT

2、AB法提取靶植物樣品的總DNA。(2)采用被子植物通用的ITS序列引物以及豆科植物通用的rbcL引物和matK引物對(duì)靶樣品的三段序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后對(duì)擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行測(cè)序分析。(3)利用CodonCode Aligner和MEGA5.1軟件對(duì)獲得的序列進(jìn)行聚類分析，計(jì)算出種間和種內(nèi)遺傳距離，建立系統(tǒng)發(fā)育鄰接樹。(4)將獲得的所有序列申請(qǐng)?zhí)峤坏紾eneBank中，獲得GeneBank登錄號(hào)。
　　 結(jié)果:(1)以改良的CTAB法所

3、提取植物樣品的總DNA經(jīng)過紫外可見分光光度計(jì)的檢測(cè)，OD260/280比值位于1.676到1.884之間，符合PCR擴(kuò)增的要求，可以作為PCR擴(kuò)增時(shí)的模板。(2)將擴(kuò)增的三段序列分別進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果顯示，ITS序列的長度為692bp～702bp;rbcL序列的長度為745bp～746bp;matK序列的長度為887bp～895bp。(3)將所得到的序列進(jìn)行對(duì)比分析，不同地區(qū)同種植物之間存在個(gè)別的堿基變異，但遺傳距離很小;不同種植物之間

4、的堿基序列存在有變異（缺失，插入的現(xiàn)象頻繁），遺傳距離較大。利用遺傳距離的遠(yuǎn)近可以準(zhǔn)確的區(qū)分開不同物種。(4)最后將所有的序列登錄NCBI數(shù)據(jù)庫中，獲得GeneBank登錄號(hào);為藥用植物數(shù)據(jù)庫增添新的內(nèi)容。
　　 結(jié)論:ITS，rbcL和matK序列均可以正確的區(qū)分開不同的豆科植物，但無法準(zhǔn)確的區(qū)分開不同地區(qū)的同種植物。為分子水平上的物種鑒定提供了依據(jù)。初步建立了中藥雞骨草的DNA條形碼，為植物通用DNA條形碼片段的研究提供了參