向日葵變黑輪枝菌的鑒定與生物學特性的研究.pdf

1、向日葵黃萎病是向日葵三大嚴重病害之一，普遍發(fā)生于向日葵主產區(qū)，引起巨大的損失。大麗輪枝菌是向日葵黃萎病的主要病原菌。據報道輪枝菌屬中變黑輪枝菌，云狀輪枝菌，三體輪枝菌和黑白輪枝菌也可導致黃萎病的發(fā)生。變黑輪枝菌誘發(fā)向日葵黃萎病未有報道。
　　本實驗選取具有典型黃萎病癥狀的向日葵病株，從病部分離、純化獲得致病菌，通過顯微鏡觀察形態(tài)結構及運用分子生物學鑒定對病原菌進行分類鑒定。根據柯赫氏法則，進行回接驗證。另外為了深入了解向日葵黃萎病

2、的發(fā)病規(guī)律，對所分離到的變黑輪枝菌的形態(tài)學特征和生物學特性進行了初步研究。
　　1.PDA培養(yǎng)基上菌落形態(tài):初期菌落呈現白色，不發(fā)達的氣生菌絲，橢圓或短圓柱形的分生孢子，透明，單孢，分生孢子梗多為二次分枝，菌絲為白色的無隔菌絲，后期產生黑色的厚垣孢子。通過ITS序列分析，病部分離病原菌為變黑輪枝菌。
　　2.變黑輪枝菌最適宜的生長溫度為24～26℃時，當溫度超過30℃時，菌落生長速率逐漸降低。溫度升高至30℃時產孢量達到最高

3、峰。將供試菌株在50℃時處理10 min，仍有菌絲可以生長，但當溫度為55℃時處理10min，無菌絲生長，可以確定該菌株的致死溫度為55℃。
　　3.變黑輪枝菌可以在pH為4～13下生長，尤其以pH為6時生長最旺盛，當pH為4，12，13時均能夠生長，說明該菌具有極強的耐酸堿性。在產孢量實驗中，pH為7時產孢量最大。
　　4.變黑輪枝菌選擇PSA培養(yǎng)基時，菌落生長最適宜，選擇PDA培養(yǎng)基時，產孢量最大。以Czapek培養(yǎng)基為

4、基礎培養(yǎng)基，以淀粉為碳源時，以硝酸鈉為氮源時生長最旺盛。以淀粉為碳源，尿素為氮源時產孢量達到最大。
　　5.注射接種法、蘸根接種法、灌根接種法和土壤拌種法處理植株時，只有注射接種法和土壤拌種法出現葉片變黃癥狀，注射接種法于90 d時莖基部出現變黑的癥狀，土壤拌種法卻無變黑癥狀。對注射接種法和土壤拌種法的病基部部分離，純化，確定有變黑輪枝菌的存在。
　　6.對54個向日葵品種進行土壤拌種接種，均出現不同程度癥狀反應，根據黃萎病