C型鈉肽對牛卵母細胞體外成熟的影響以及牛早期胚胎凋亡、印記基因表達的研究.pdf

1、卵母細胞的體外成熟(in vitro Maturation，IVM)技術(shù)和胚胎體外培養(yǎng)(in vitroCulture，IVC)是生殖生物學(xué)中的關(guān)鍵技術(shù)，在畜牧業(yè)生產(chǎn)中有廣泛的應(yīng)用。為了提高牛卵母細胞體外成熟質(zhì)量以及提高早期胚胎發(fā)育的質(zhì)量，本論文研究了減數(shù)分裂抑制劑C型鈉肽（C-type natriuretic peptide，CNP）預(yù)處理牛卵母細胞后對卵母細胞的成熟質(zhì)量的影響，同時研究了不同氧氣濃度對胚胎細胞凋亡的影響以及父源與母源

2、性印記基因在牛早期胚胎體外發(fā)育過程中的差異性表達。
　　本研究得到以下幾點結(jié)論:
　　1、以常規(guī)的牛卵母細胞體外成熟24 h為對照，研究了CNP預(yù)處理牛卵母細胞6h，再進行成熟培養(yǎng)28 h后的成熟情況。發(fā)現(xiàn)經(jīng)CNP預(yù)處理組獲得的成熟卵母細胞，從線粒體分布、線粒體DNA拷貝數(shù)水平以及受精后胚胎發(fā)育成囊胚的質(zhì)量均優(yōu)于常規(guī)成熟的卵母細胞，表明C型鈉鈦預(yù)處理可以有效改善牛卵母細胞體外成熟的質(zhì)量。
　　2、分別檢測了常規(guī)方法成熟

3、卵母細胞和CNP預(yù)處理組的成熟卵母細胞的ROS水平和GSH濃度，結(jié)果顯示利用C-型鈉肽對牛卵母細胞預(yù)處理6h然后體外成熟28 h會導(dǎo)致牛卵母細胞內(nèi)ROS水平的提高，但是，由于GSH在此過程中對活性氧的清除作用保護了卵母細胞的受精能力及受精后胚胎的發(fā)育能力。表明利用CNP預(yù)處理進行的牛卵母細胞兩步成熟過程沒有引起卵母細胞老化。
　　3、研究了不同氧氣濃度對牛早期胚胎細胞的凋亡以及凋亡基因表達水平的影響，結(jié)果表明在低氧環(huán)境中培養(yǎng)的胚胎

4、的凋亡水平明顯低于高氧環(huán)境中的胚胎，表明低氧環(huán)境更有利于牛體外受精胚胎的發(fā)育;并且培養(yǎng)環(huán)境中的氧氣濃度在一定程度上影響了牛胚胎細胞中凋亡相關(guān)基因Mcl-1、Bad、Bak、Bik和Caspase-3的表達，這些基因表達產(chǎn)物可能相互協(xié)同影響了胚胎細胞凋亡的發(fā)生。
　　4、利用Real-time PCR技術(shù)分別檢測三個父源性印記基因Gnas、Grb10、Xist和三個母源性印記基因Magel2、Sgce和SNRPN在牛孤雌激活(Par

5、thenogeneticActivation，PA)胚胎和體外受精(In Vitro Fertilization，IVF)胚胎中的表達水平。結(jié)果顯示在IVF和PA胚胎發(fā)育過程中，父源性印記基因和母源性印跡基因表達模式存在一定的差異，這對牛早期胚胎的正常發(fā)育可能發(fā)揮重要作用。
　　總之，以C型鈉鈦預(yù)處理為基礎(chǔ)的兩步成熟法可以有效改善牛卵母細胞的體外成熟質(zhì)量;低氧環(huán)境降低了牛胚胎體外發(fā)育過程凋亡的發(fā)生，更有利于牛體外受精胚胎的發(fā)育;牛