對硫磷誘導果蠅細胞的基因表達譜及差異表達基因與抗性的關(guān)系研究.pdf

1、學位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作和取得的研究成果。本論文中除引文外，所有實驗、數(shù)據(jù)和有關(guān)材料均是真實的。本論文中除引文和致謝的內(nèi)容外，不包含其他人或其它機構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對本研究所做的貢獻均己在論文中作了聲明并表示了謝意。學位論文作者簽名： 日 期：2 9 畔朝矽自學位論文使用授權(quán)聲明研究生在校攻讀學位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬南京師范大學。學校有權(quán)保存本學位論文的

2、電子和紙質(zhì)文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本學位論文的部分或全部內(nèi)容，可以采用影印、復印等手段保存、匯編本學位論文。學?？梢韵驀矣嘘P(guān)機關(guān)或機構(gòu)送交論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱。( 保密論文在解密后遵守此規(guī)定)保密論文注釋：本學位論文屬于保密論文，密級：——保密期限為——年。學位論文作者簽名：日 期： 指導教師簽名：習哆悸栝功臼日 期：土I < ．j ．‘弘A b s 仃a c tA n a l y s i so fg e

3、n e s e x p r e s s i o ni nt h ep a r a t h i o ni n d u c i b l eD r o s o p h i l a c e l l sa n d t h er e l a t i o no f d i f f e r e n t i a l l y e x p r e s s e dg e n e s t or e s i s t a n c eA b s t r a c tO

4、r g a n o p h o s p h o r u s p e s t i c i d ei so n e o f t h em o s t p r o d u c t i o n a n d w i d e l yu s eo f p e s t i c i d ei nt h ew o r l d ．P a r a t h i o ni s w i d e l yu s e d f o r i t ss t r o n g t

5、o x i c i t ya n d q u i c k l ya c t i o n ．I tm a k e st h er e s i s t a m ef o r aI a r 薩a m o u n t o f u n r e a s o n a b l eu s ef o ra l o n g t i m e ．B u t t h em e c h a n i s m so f s t r e s sf o rp a r a t

6、 h i o na r eu n c l e a r ．T h es t r e s sm e c h a n i s m a n df u n c t i o n t a r g e t s o f p a r a t h i o nw e r e t m c o v e r e da t f l a e g e n o m e l e v e l 證t h i sp a p e r ．T h ec y t o t o x i c i

7、 t ya n ds u r v i v a l r a t e o f p a r a t h i o ns t r e s s e dc e l l w a sd e t e c t e db yu s eo fc e l l c o u n t i n g k i t - 8 ( C C K 一8 ) a n dc e l l c o u n tp l a t e i n D r o s o p h i l a S 2 m o d

8、 e lc e l l T h ed i f f e r e n c eo fg e n e se x p r e s s i o nb e t w e e np a r a t h i o n s t r e s s e d c e l l sa n dn o r m a lc e l l s w e r ec o m p a r e d ，a n d t h e g e n e sr e l a t e dt o p a r a t

9、 h i o n s t r e s sw e r es c r e e n e d t h r o u g hg e n ee x p r e s s i o ns p e c t r u ma n d r e a l - t i m ef l u o r e s c e n c e q u a n t i t a t i v eP C R ( q R T - P C R ) ．T h e r e s u l t ss h o w n

10、 t h a tt h ed e a t ho f c e l lp r o c e s s e da t3 5 I x g ／m L ( p p m ) p a r a t h i o ni s m i n i m a b ym a n y e x p e r i m e n t so fC C K - 8 k i ta n d c e l lc o u n t p l a t ed e t e c t i o n ．T h ee x

11、 p r e s s b no f 5 3 4g e n e so b v i o u s l y c h a n g e db e t w e e n3 5 p p m p a r a t h i o nt r e a t e dc e l l sa n dc o r a r o lc e l l s ( o n l ya d d e dm e t h a n o ls o l v e n tp r o c e s s i n gc

12、e l l s a n d a d d e d n o n en o r m a l c e l l s ) b y d i g i t a lg e n ee x p r e s s i o n p r o f i l e sd e t e c t i o n ．O f t h e m , t h ec y t o c h r o m eP 4 5 0g e n e ，s u c ha sC y p 6 a 8a n dC y p 4

13、 e lg e n e e x p r e s s i o nw e r ei n c r e a s e d 3 ．3 4 t i m e s a n d 2 ．0 4 t i m e s ，C y p 4 a d l ，C y p - 4 d 8 ，C y p 3 1 3 a 4 h a v e s p e c i f i ce x p r e s s i o n ．G S Tg e n e s G S T E 6e x p r e

14、 s s i o n i n c r e a s e 2t i m e sa n d G S T E 7h a s s p e c i f i ce x p r e s s i o n ．A n o d o r a n tb i n d i n gp r o t e i n g e n e O b p 9 9 a ，t m m p o r t e r s g e n e M F S 3a n dC G 5 3 2 1g e n ee x

15、 p r e s s i o ni n c r e a S e da b o u t 2 ．5 t i m e s ．B u t F i v ek i n d so f N A D H g e n e ：N D 3 ，N D 4 , N D 5 , N D 6 , N D 4 Le x p r e s s i o n w a sd e c r e a s e d a b o u t 2 - 3 ．1 1 t i m e s ．M a n

16、 yr e d o xe n z y m e s d e h y d r o g e n a s e g e n e sa l s o a p p e a r e dd i f f e r e n t e x p r e s s i o n ．W ec h o s e e i g h td i f f e r e n te x p r e s s e d g e n e s t o c h e c k t h e r e l i a b

17、 i l i t yo fd i g i t a l g e n ee x p r e s s i o n p m f i l ea n d s e l e c t i o n o f r e s i s t a n tc o n c e n t r a t i o n b y q R T - P C R ．T h e r e s u l t ss h o w nt h e c o n s i s t e n c eo f f l u

18、o r e s c e n c e q u a n t i t a t i v ew i t h g e n ee x p r e s s i o n p r o f i l e s ，a n d t h er e s i s t a n tc o n c e n t r a t i o ns e l e c t e db yC C K - 8 k i tw i t hd e t e c t e db yf l u o r e s c