球蘭種質(zhì)資源遺傳多樣性的ISSR分析及組培技術(shù)初步研究.pdf

1、球蘭（Hoya carnosa R. Br），蘿摩科球蘭屬植物，起源于東南亞及澳洲地區(qū)。已有研究表明，球蘭對不同環(huán)境具有優(yōu)良的適應(yīng)性，同時具有較高的觀賞價值和藥用價值。然而，目前關(guān)于球蘭種質(zhì)資源遺傳背景及組織培養(yǎng)技術(shù)的研究較少，嚴重制約了球蘭新品種選育及大規(guī)模工廠化生產(chǎn)。鑒于此，本試驗采用ISSR分子標記技術(shù)結(jié)合NTSYS等軟件對福建本地及東南亞引進的多份球蘭種質(zhì)資源進行了遺傳多樣性分析，同時對球蘭組織培養(yǎng)技術(shù)進行了研究，以期為球蘭種質(zhì)

2、資源的進一步開發(fā)利用、藥用成分研究及大規(guī)模生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支撐。試驗結(jié)果如下：
　　1球蘭種質(zhì)資源遺傳多態(tài)性分析
　　利用ISSR分子標記技術(shù)從42條ISSR隨機引物中篩選出12條擴增條帶清晰、多態(tài)性好的引物對43份球蘭種質(zhì)資源進行ISSR-PCR分析。獲得的球蘭DNA指紋圖譜中，12條引物共擴增69個條帶，擴增片段大小介于200-2500 bp，且均為多態(tài)性條帶，多態(tài)性比率達到100％，可見這些球蘭種質(zhì)資源之間的遺傳

3、多態(tài)性極為豐富。
　　2球蘭種質(zhì)資源遺傳相似系數(shù)分析
　　采用NTSYS2.10e對43份球蘭樣品的遺傳相似系數(shù)進行統(tǒng)計，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該球蘭種質(zhì)資源個體之間的遺傳相似系數(shù)介于0.464-0.797，進一步說明不同球蘭種質(zhì)資源之間的遺傳多樣性豐富。其中彩葉球蘭（Hoya carnosa）與刺球蘭（Hoya acicularis）之間的遺傳相似系數(shù)最小，為0.464，即二者之間的遺傳距離最大。而來自同一個種的貝拉內(nèi)錦（Hoya b

4、ella）和貝拉外錦（Hoya bella）之間的遺傳相似系數(shù)最大，達到0.797，兩份種質(zhì)資源之間的親緣關(guān)系最近。
　　3基于遺傳距離的球蘭種質(zhì)資源遺傳聚類分析
　　基于遺傳距離采用NTSYS2.10e對43份球蘭種質(zhì)資源進行遺傳聚類分析。根據(jù)獲得的聚類樹狀圖，設(shè)定閾值（GS）為0.527時，球蘭種質(zhì)資源可分為兩個大組，其中來源于福建本地的彩葉球蘭（Hoya carnosa）和形態(tài)學(xué)差異較大的刺球蘭（Hoya acicul

5、aris）歸為一組（A組），而其他品種歸為一組（B組）。當閾值（GS）取0.545時，A大組中的兩份不同球蘭進一步分開；而當閾值（GS）為0.574時，B大組分為B-a與B-b兩個亞組，其中卷葉類型的卷葉內(nèi)錦（Hoya compacta var in）和卷葉外錦（Hoya compacta var out）獨立為一個亞組，而其他品種聚為另一亞組。遺傳聚類分析結(jié)果與不同球蘭種質(zhì)資源的地理分布或形態(tài)學(xué)差異一致，也進一步證明了該聚類結(jié)果具有較

6、高的準確性。
　　4球蘭愈傷組織的誘導(dǎo)與增殖
　　以心狀球蘭葉片為試驗材料，研究不同培養(yǎng)基對球蘭愈傷組織誘導(dǎo)、增殖及分化的影響。研究結(jié)果表明，MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+2,4-D1.0 mg/L+GA l.0 mg/L+蔗糖3%的培養(yǎng)基中愈傷組織的誘導(dǎo)效果最好，誘導(dǎo)率為70.8%；而誘導(dǎo)獲得的球蘭愈傷組織在 MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+2,4-D1.0 mg/L+GA