小鼠未成熟卵母細胞染色質構型及其與體外成熟能力和發(fā)育能力關系的研究.pdf

1、堡壁小鼠圭成熟卵母細胞染色質構型及其與成熟能力，發(fā)育能力關系的研宄碩士論文摘要目前越來越多的證據(jù)表明體外成熟培養(yǎng)前卵泡卵母細胞發(fā)育階段的差異可能是卵母細胞體外成熟系統(tǒng)不完善的原因之一，這首先反映在未成熟卵母細胞核染色質構型就存在差別。本論文駔小鼠為動物模型，對卵子發(fā)生期間核染色質構型的變化以及這些構型與排卵、成熟、受精和發(fā)育的關系進行了初步研究r結果如下：1)成鼠卵巢有腔卵泡內的卵母細胞拔有四種染色質構型：sN、NSN、pSN、DNsN

2、。其中主要是SN和NSN型，pSN和pNSN的比例相對很少；2)17日齡幼年小鼠開始出現(xiàn)SN型卵母細胞，18、19日齡時SN型卵母細胞比例顯著增加；3)直徑小于60pm的卵母細胞染色質構型均為NSN型，卵母細胞生長到直徑為609m以上時，卵母細胞開始出現(xiàn)SN染色質構型：當直徑達至q7080pm時，SN型卵母細胞比例明顯增加：直徑小于70um的卵母細胞pSN和pNsN染色質構型比率高于直徑7080pm的卵母細胞；4)68周齡小鼠經(jīng)PMSG

3、處理后，直徑60701tin的NSN型卵母細胞減少7080urn的SN型卵母細胞顯著增加；經(jīng)hCG處理后，直徑7080om的SN型卵母細胞的比率比只注射PMSG組減少，SN型卵母細胞比率又回到了捧卵前水平：5)SN型和NSN型卵母細胞在體外培養(yǎng)時都能自發(fā)發(fā)生GVBD，并且可成熟到M11期；但是，SN型卵母細胞的減數(shù)分裂能力(GVBD和發(fā)育至MII期的能力)優(yōu)于NSN型卵母細胞：6)從發(fā)育上看，體外成熟到M11期的sN型卵母細胞和NSN型

4、卵母細胞的受精率沒有明顯差異；但SN型卵母細胞的2細胞發(fā)育率高于NSN型卵母細胞；7)不同鼠齡的小鼠經(jīng)PMSG處理后，其SN型卵母細胞的比率沒有差異，但是青年小鼠hCG作用后比PMSG處理后的SN型卵母細胞減少155％，但是年老的小鼠則只減少了28％：、8)隨著年齡的增加，在卵巢表面有腔卵泡中的SN型卵母細胞的比率增加；／。，關鍵詞：染色質構型GV期卵母細胞小鼠一旦蘭堡塵墨圭塑塑墨塑塞銎魚堊塑皇絲墨蘭墮苧些壟：莖!墮查叁墨墮堡塞壁主笙苧

5、前言胚胎工程操作如胚胎體外生產(chǎn)、胚胎克隆等研究所需要的大量成熟卵母細胞主要是由卵母細胞體外成熟(1vM)提供的盡管許多種動物的IVM系統(tǒng)取得了根大的進展，目前的ⅣM系統(tǒng)還并不十分完善，這在豬和馬尤為突出側如母馬卵母細胞體外成熟比率同其它動物相比相對較低，大約為15％一65％；(Aimdal。1996、1994；Bczardeta1，1997：Brucketa1，1996；Choieta1，1993)；豬的體外成熟率(大約為90％)雖然很

6、高但是豬IVM／IVF胚胎移植后發(fā)育到期的比率也只有5％10％(Funahshieta1，1997’；Abeydeemela1，1998)目前還不十分清楚導致發(fā)育率低的確切原因一些研究者發(fā)現(xiàn)，在豬卵母細胞成熟培養(yǎng)前，既使嚴格選擇卵丘細胞緊密、卵母細胞胞質均勻的卵丘卵母細胞復合體(COCs)進行培養(yǎng)，其第一次減數(shù)分裂雙線期(卵母細胞核染色質構型)也有很大的差別甚至從初情期前動物同一個卵巢收集的未成熟卵母細胞，其卵母細胞核染色質構型也不相同

7、(Longeta1，1997)，因而有的研究者推斷有腔卵泡內卵母細胞核染色質構型的異質性可能是豬卵母細胞體外成熟結果差異較大的原因之一(Dingeta1，1994)有的研究者還提出，在體外成熟時使未成熟卵母細胞處于同一發(fā)育時期能提高IM／IVF胚胎的質量，并且進行了一定的實驗，證明IVId／lvF胚胎的質量有所提高(FunahshetaL，1997；Grupcn吐a1，1997；PFatherda1，1998)但是目前還沒有真正研究清楚

8、有腔卵泡卵母細胞核染色質異質性與卵母細胞質量的關系，因而對家畜和人的體外成熟、體外受精等領域而言研究有腔卵泡卵母細胞核染色質異質性的生理特征具有重要的理論和實踐意義。11有腔卵泡內卵母細胞染色質構型的分類關于有腔卵泡內卵母細胞染色質構型的種類，不同動物不盡相同MotlikandFulka(1976)應用醋酸地衣紅壓片染色，觀察染色質、桉仁和核膜消失及hCG注射后生發(fā)泡的變化時發(fā)現(xiàn)，豬的未成熟卵母細胞(GV期)有(GVI4)四種染色質構型

9、關于有腔卵泡內卵母細胞核結構的異質性在其它動物也有研究報道有關小鼠有腔卵泡卵母細胞染色質構型的研究相對較為詳盡。MtlsonandAlbcrtin(1990)在分析小鼠冷凍切片的基礎上，確定小鼠的前期卵母細胞經(jīng)歷了l、II、III和Iv四種核仁染色質相關的構型t)ebey等(1993)認為有腔卵泡中獲得的GV期卵母細胞可以分為兩種主要的類型第一類，被命名為。SN”型(圍繞核仁型，surrounednucleolus)，染色質較凝集，并圍

10、繞在“核仁樣小體”周圍(nucleoluslikebody，HIB)(這里用。NLB”這一術語代替“核仁”是因為完全長大的卵母細胞的核仁具有特定的電鏡結構和功能)：另一類是染色質彌散，核仁樣小體沒有染色質圍繞被命名為。NSN“型(未圍繞核仁型，nonsmrmmednucleolus)。中間型有兩種，一種是在核仁樣小體對側聚合著一塊凝集的染色質，被稱之為口NsN型(pardyNSN)，另一種是有部分染色質圍繞著核仁樣小體，披稱之為pSN型