中藥大黃抗內毒素有效成分的分離與提取.pdf

1、細菌內毒素(也稱內毒素)是革蘭氏陰性細菌細胞壁結構中的類脂多糖體(脂多糖，LPS)，此種脂多糖經細菌胞壁合成后被轉運到細胞表面構成胞壁外膜的組成成分，在細菌死亡溶解潰后從細胞結構中釋放出來。內毒素生物活性復雜，對人體作用廣泛，能使臟腑組織發(fā)生嚴重病變，可引起休克、彌散性血管內凝血(DIC)、多器官功能衰竭等。小劑量的LPS即可引起廣泛的生物學作用及病理學反應，如內毒素血癥、休克肺、心臟抑制及口腔疾患等，死亡率高達20％～60％。

2、 大黃為常用中藥，具有泄下、抗菌、抗腫瘤、抗高脂血癥，降低血壓、健胃、利膽保肝、強心、消炎、延緩衰老、調節(jié)免疫等作用。近代研究證明，大黃具有清除體內氧自由基，調節(jié)免疫等重要藥理活性?，F已從大黃中分離到蒽醌、二蒽酮芪、苯丁酮、單寧、萘、色酮等不同種類的80種化合物，大體上分為蒽醌類、多糖類、鞣質。 本實驗分別以水和乙醇為溶劑，對大黃進行提取，通過正交實驗，比較了兩種溶劑對大黃的提取效果。實驗發(fā)現：以水為溶劑時，煎煮次數對大黃總蒽醌

3、提取物具顯著性影響(P＜0.05)，煎煮次數和浸泡時間對結合型蒽醌具有一定影響(0.05＜P＜0.1)，煎煮次數較多，3種物質的提取率越高，這說明濃度差是大黃有效成分浸出的重要因素。對總蒽醌而言，浸泡比不浸泡提取率要-1-高。但浸泡0.5h與浸泡12h無顯著性差異，而結合型及還原型蒽醌則以不浸泡或浸泡0.5h為好，提示兩者在水中的不穩(wěn)定性。煎煮時間在60min之內，對總蒽醌無顯著影響(P＞0.1)，而結合型蒽醌則以30min煎出量最高，

4、還原型蒽醌以10min最高。這亦說明，加熱時間長，對后兩種的穩(wěn)定性會產生一定的影響。以乙醇為溶劑的正交試驗結果可看出，乙醇濃度為80％，回流時間1小時，回流次數2次，溶劑量為10倍。對于總蒽醌含量而言，以乙醇為溶劑，回流次數仍是最重要的因素。乙醇濃度和回流時間對還原型蒽醌具顯著性影響(P＜0.05)，而加醇量則具一定影響(0.05＜P＜0.1)。從實驗結果可看出，水提組與醇提組比較，醇提組對3種大黃組分的提取效果明顯優(yōu)于水提組，醇提組中

5、，以80％乙醇為優(yōu)，且煎煮時間均不宜過長，控制在1左右為宜。 為進一步將大黃中的有效成分分離，對大黃的乙醇初提物在不同的甲醇比例下進行分離，實驗發(fā)現，當氯仿：甲醇：水=4：3.8：2時的分離結果最好。使用前使兩相溶劑系統(tǒng)在分液漏斗中充分振蕩，讓其兩相間彼此盡量飽和，然后再靜置分層，取上相做固定相，下相做移動相。上機條件為流動相流速2.00mLmin，儀器轉速800r/min的分離條件。最后得到6種單一的蒽醌類物質。 將大