水稻品種抗瘟遺傳多樣性及抗瘟基因分子標(biāo)記研究.pdf

1、用抗病基因保守區(qū)域合成的38個(gè)引物組合成28個(gè)引物對(duì),對(duì)中國(guó)水稻麗江新團(tuán)黑谷(LTH)近等基因系品種進(jìn)行擴(kuò)增.結(jié)果表明,不同引物對(duì)對(duì)同一近等基因系的擴(kuò)增圖譜有很大差異.引物對(duì)LM637/LM638擴(kuò)增譜帶最多,共40條;Ptokin1N/Ptokin2N僅擴(kuò)增1~2條模糊的條帶;而Ptokin2-inv1/Ptokin2-inv2擴(kuò)增后無(wú)條帶出現(xiàn).此外,同一引物對(duì)(S2/AS1)對(duì)不同近等基因系(LTH與Co39)擴(kuò)增的圖譜亦有較大差異

2、.選擇擴(kuò)增譜帶豐富且據(jù)不同類型保守區(qū)域設(shè)計(jì)的3對(duì)引物XLRRfor/XLRRrev、S1/AS3和Ptokin1/Ptokin2,對(duì)江蘇27個(gè)品種進(jìn)行擴(kuò)增.結(jié)果指出,3對(duì)引物共擴(kuò)增出清晰可辨的譜帶127條,其中多態(tài)性帶101條,占總數(shù)的79.52％.3對(duì)引物中擴(kuò)增譜帶和多態(tài)性帶頻率最高的是XLRRfor/XLRRrev,共擴(kuò)增譜帶47條,其中多態(tài)性帶40條,占85.11％.此外,3對(duì)引物擴(kuò)增的多態(tài)性譜帶的分子量大小基本無(wú)差異.根據(jù)聚類分

3、析,3對(duì)引物對(duì)或引物組合擴(kuò)增的RGA圖譜可將品種分為多種類型,這些RGA圖譜類型與病菌7個(gè)小種接種鑒定的抗病表型沒(méi)有完全的對(duì)應(yīng)關(guān)系.其中XLRRfor/XLRRrev引物對(duì)其組合的RGA圖譜類型似乎與抗病表型有較好的吻合程度,這可能是由于該引物對(duì)來(lái)自水稻之緣故.以28對(duì)引物對(duì)LTH近等基因系品種進(jìn)行擴(kuò)增,有11對(duì)引物能擴(kuò)增出特異性條帶,共回收特異性片段33個(gè).將回收的片段重新擴(kuò)增,有11個(gè)片段獲單一條帶.選擇其中兩個(gè)480~490bp片

4、段(HS-1和HS-19)進(jìn)行探針標(biāo)記.點(diǎn)雜交試驗(yàn)表明,所有供試品種都有雜交信號(hào),這說(shuō)明這些片段在各品種中都有相似的序列或部分同源序列.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后經(jīng)Southern雜交發(fā)現(xiàn),片段HS-1在含有Pi-ta<'2>抗性基因的品種F-128-1、N04中有特異的雜交帶出現(xiàn),這表明此序列可能與抗性基因Pi-ta<'2>連鎖或是抗性基因的一部分.用引物對(duì)XLRRfor/XLRRrev對(duì)202個(gè)品種進(jìn)行擴(kuò)增,在480bp處出現(xiàn)特異帶的品種