29365.芽孢型益生菌黏膜疫苗平臺(tái)的構(gòu)建與生物學(xué)特性研究

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文芽孢型益生菌黏膜疫苗平臺(tái)的構(gòu)建與生物學(xué)特性研究姓名：李麗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：余新炳20090928中山大學(xué)博十學(xué)位論文芽孢型益生菌粘膜疫苗平臺(tái)的構(gòu)建與生物學(xué)特性研究構(gòu)建表達(dá)體系：在芽孢外表面展示(與芽孢CotB或CotC外殼蛋白融合表達(dá))；在芽孢萌發(fā)為繁殖體中的表達(dá)；以及芽孢與繁殖體雙轉(zhuǎn)構(gòu)建相結(jié)合的方式表達(dá)。熒光免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)、激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)到外源蛋白在芽孢外表面成功地表達(dá)，同時(shí)也證明了多價(jià)

2、重組抗原的大分子結(jié)構(gòu)不影響芽孢外層蛋白的組裝和芽孢形成。本文還評(píng)估了芽孢的免疫佐劑效應(yīng)。我們利用分子信息學(xué)進(jìn)行分析并用實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)了芽孢桿菌不同種屬的物理化學(xué)特性，選擇枯草芽孢桿菌PY79，HU58和克勞氏芽孢桿菌O／C作為非重組芽孢蛋白疫苗的載體與蛋白混合，證實(shí)了芽孢對(duì)蛋白的吸附作用，用吸附蛋白的芽孢滴鼻免疫小鼠能引起強(qiáng)烈的黏膜免疫反應(yīng)，在肺組織、糞便、唾液中均能檢測(cè)到高水平的Sj26GST特異性slgA的分泌。同時(shí)，也能激發(fā)小鼠系統(tǒng)

3、免疫反應(yīng)，IgG亞類(lèi)提示為以Thl占主導(dǎo)的Thl／Th2混合型免疫反應(yīng)。利用此免疫反應(yīng)誘導(dǎo)的均衡Thl和Th2反應(yīng)，有利于提升日本血吸蟲(chóng)免疫保護(hù)作用。證實(shí)了芽孢作為新型黏膜疫苗佐劑，能提高機(jī)體特異性和非特異性免疫水平，能調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)類(lèi)型。非重組芽孢蛋白疫苗免疫效果較重組芽孢更佳，但由于其吸附的抗原蛋白不能通過(guò)胃屏障，只能以滴鼻形式免疫而使其應(yīng)用受到一定限制。本文通過(guò)構(gòu)建多種芽孢疫苗技術(shù)平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)了外源蛋白在重組枯草桿菌的芽孢衣殼展示和繁

4、殖體的雙功能表達(dá)，并使用不同的黏膜免疫方式進(jìn)行了免疫學(xué)評(píng)價(jià)。研究表明，最有效的重組芽孢疫苗接種策略是芽孢表面與營(yíng)養(yǎng)繁殖體細(xì)胞中的雙轉(zhuǎn)表達(dá)，使用三次劑量足以刺激小鼠產(chǎn)生Sj26GST特異性免疫反應(yīng)。此外，對(duì)于非重組芽孢蛋白疫苗，滴鼻免疫是最佳接種方式，小劑量的接種能引起強(qiáng)烈地特異性地系統(tǒng)、黏膜免疫反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng)。本文構(gòu)建的多種形式的益生菌芽孢黏膜疫苗平臺(tái)和免疫學(xué)評(píng)價(jià)體系，為芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)提供了應(yīng)用指導(dǎo)，為研發(fā)高效的第二代抗日本血吸蟲(chóng)