轉(zhuǎn)Bt基因克螟稻秸稈還土對水田厭氧微生物、生物學(xué)活性及其種群多樣性的研究.pdf

1、轉(zhuǎn)基因作物的生態(tài)安全性一直是人們關(guān)心的熱點(diǎn)問題之一.該論文研究了轉(zhuǎn)Bt基因克螟稻秸桿還土對水田厭氧微生物、土壤酶活性、產(chǎn)甲烷活性、土壤細(xì)菌種群多樣性及土壤產(chǎn)甲烷細(xì)菌多樣性的影響,并且對四種土壤DNA提取方法進(jìn)行了比較,研究結(jié)果總結(jié)如下:1、克螟稻秸桿還土對土壤厭氧微生物的影響.采用亨蓋特厭氧技術(shù)及其滾管法研究了轉(zhuǎn)基因克螟稻秸桿還土對土壤厭氧微生物數(shù)量的影響,包括反硝化細(xì)菌、厭氧發(fā)酵細(xì)菌、厭氧自生固氮細(xì)菌、產(chǎn)甲烷細(xì)菌.2、克螟稻秸桿還土對

2、土壤酶活性的影響.研究了克螟稻秸桿還土對各種土壤酶活性的影響,結(jié)果表明,在培養(yǎng)期間秸稈處理的土樣(NBt和NCk)組中各土壤酶活性均顯著高于無秸桿對照組(No)(p<0.05).NBt處理土壤的磷酸酶、纖維素酶活性與NCk處理相比只在培養(yǎng)前期有顯著差異(p>0.05),而脫氫酶及其產(chǎn)甲烷活性則出現(xiàn)了顯著的差異.3、克螟稻秸桿還土對土壤細(xì)菌種群多樣性的影響.采取聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-變性梯度凝膠電泳(PCR-DGGE)的方法研究了轉(zhuǎn)基因克螟稻秸

3、桿還土對土壤細(xì)菌種群多樣性的影響.通過細(xì)菌通用引物擴(kuò)增了土壤細(xì)菌的16S rDNA片段并進(jìn)行DGGE電泳,計(jì)算各個(gè)樣品的Shannon豐富度指數(shù)和Pielous均勻度指數(shù),以此分析各處理樣品的細(xì)菌種群多樣性差異.結(jié)果表明,在培養(yǎng)的第3、4周時(shí)NBt處理土壤樣品的Shannon指數(shù)均明顯高NCk處理的Shannon指數(shù),而其它培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)二者沒有表現(xiàn)出差異,說明經(jīng)過克螟稻秸桿處理土壤的細(xì)菌多樣性在短期內(nèi)要高于親本對照處理.Pielous均勻

4、度指數(shù)在第2周和第6周要明顯低于親本稻秸桿處理.4、克螟稻秸桿還土對土壤產(chǎn)甲烷細(xì)菌種群多樣性的影響.為了解轉(zhuǎn)基因克螟稻對淹水土壤中產(chǎn)甲烷細(xì)菌多樣性的影響,采用產(chǎn)甲烷細(xì)菌特異性引物擴(kuò)增產(chǎn)甲烷細(xì)菌16S r DNA片段并結(jié)合PCR-DGGE方法,計(jì)算各個(gè)樣品的Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù),以此分析轉(zhuǎn)基因水稻秸桿還土對水田產(chǎn)甲烷細(xì)菌種群多樣性的影響.5、四種土壤DNA提取方法的比較.采用4種土壤DNA提取方法提取了5種類型土壤的微生