那西肽產(chǎn)生菌s.actuosus的育種及發(fā)酵條件的優(yōu)化

1、復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)那西膚產(chǎn)生菌Sactuosus的育種及發(fā)醉?xiàng)l件的優(yōu)化中文摘要本研究對(duì)那西膚產(chǎn)生菌Sactuosus進(jìn)行誘變、原生質(zhì)體再生和Genomeshuffling篩選高活力菌種，同時(shí)對(duì)代謝工程方面進(jìn)行研究和發(fā)酵條件優(yōu)化。結(jié)果顯示通過紫外線及亞硝基孤聯(lián)合誘變獲得高產(chǎn)菌株ZZ，該菌株進(jìn)行3次傳代試驗(yàn)顯示比較穩(wěn)定。然后對(duì)高產(chǎn)菌株Zz發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，在原培養(yǎng)基中添加2%黃豆餅粉、2%淀粉、0.1%硫酸鈉及0.01%硫酸銅可以提高發(fā)酵單位，另

2、外對(duì)補(bǔ)料條件、接種時(shí)間等發(fā)酵條件進(jìn)行改變，結(jié)果顯示種齡采用30小時(shí)、初始pH值為7.0、補(bǔ)料采用60%的葡萄糖較適合菌種Z:的發(fā)酵，菌種Zz相對(duì)于出發(fā)菌種Z。那西膚提高產(chǎn)量達(dá)26.3%02003年提交給杭州匯能生物技術(shù)公司生產(chǎn)，中試生產(chǎn)發(fā)酵單位最高達(dá)2300pg毗，產(chǎn)品占領(lǐng)全國市場。通過原生質(zhì)體再生獲得的菌種Z?；盍^高，活力最高達(dá)到1600pg加L，并且測定其生化曲線，說明采用原生質(zhì)體再生方法是選育高產(chǎn)菌種的一條較好的途徑。但菌種Z傳

3、至第3代不穩(wěn)定，應(yīng)此菌種穩(wěn)定的工作必須進(jìn)行。本研究也嘗試用genomeshuffling方法選育高發(fā)酵單位菌種，但結(jié)果不理想，可能與篩選菌株及時(shí)間較少有關(guān)。本研究同時(shí)對(duì)星點(diǎn)設(shè)計(jì)在發(fā)酵上的應(yīng)用進(jìn)行初步探索，星點(diǎn)設(shè)計(jì)可以通過三維圖或者等高線迅速預(yù)測發(fā)酵影響因素和發(fā)酵單位的數(shù)值。本研究結(jié)果顯示:那西膚發(fā)酵單位與硫酸鈉、硫酸按和氯化鈉之間關(guān)系可以用一個(gè)明確的二項(xiàng)方程式計(jì)算，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.8960產(chǎn)物通過有機(jī)溶劑提取，用HPLC鑒定，再用核磁共