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文檔簡介
1、目的：分離尿路致病性大腸桿菌(Uropathogenic Escherichia coli，UPEC)臨床流行株，構(gòu)建UPEC溶血素A(hemolysin A，hlya)基因重組質(zhì)粒并進(jìn)行序列分析。了解其基因變異情況。 方法：自臨床尿路感染標(biāo)本中分離溶血性大腸桿菌10株。按GenBank中的hlya基因保守序列設(shè)計合成引物。以獲得的UPEC基因組DNA為模板，用PCR方法擴(kuò)增其hlya基因片段。將目的基因克隆至pUC18載體，轉(zhuǎn)
2、化大腸桿菌DH5a，篩選并鑒定陽性克隆。對獲得的陽性克隆測序并進(jìn)行同源性分析。 結(jié)果：擴(kuò)增的hlya目的基因大小744bp。重組質(zhì)粒經(jīng)酶切及PCR鑒定表明獲得正確重組子。重組菌株在血培養(yǎng)基上可產(chǎn)生β溶血環(huán)。測序結(jié)果顯示，10個分離株DNA序列同源性高于99.7％。其與GenBank中的hlya基因序列的同源性為99％以上。10個序列中共發(fā)生13處堿基的替代，但均屬于同義突變，沒有堿基的插入與缺失。 結(jié)論：UPEC hly
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