慢性HBV感染不同階段細胞免疫及其與病毒清除的關系.pdf

1、目的：
　　 研究慢性HBV感染不同階段細胞免疫及其與病毒清除的關系。
　　 方法：
　　 用流式細胞儀檢測50例慢性HBV感染者外周血的T細胞亞群。選擇其中進行肝組織穿刺活檢術的慢性乙型肝炎住院病例40例，留取活檢肝組織分別進行蘇木素伊紅染色和免疫組織化學CD4、CD8染色，并用實時熒光定量PCR的方法檢測肝組織內的HBV-DNA定量。10例正常對照肝組織選自肝血管瘤手術患者瘤旁正常肝組織。
　　 結果

2、：
　　 1.慢性HBV感染組與正常對照組T細胞亞群比較。
　　 T細胞亞群在慢性HBV感染組與正常對照組間比較，差別無統計學意義（P>0.05）。然后將慢性HBV感染組根據HBV-DNA定量分為HBV-DNA陽性組和HBV-DNA陰性組比較發(fā)現：HBV-DNA陽性組的CD4+T細胞百分率及CD4/CD8比值較HBV-DNA陰性組及正常對照組明顯降低（P<0.05，P<0.01，P<0.05，P<0.05），但是T細胞亞

3、群在HBV-DNA陰性組與正常對照組間比較差異無統計學意義（P>0.05）。
　　 2.慢性HBV感染的不同階段外周血T細胞亞群的變化。
　　 外周血T細胞亞群在慢性HBV感染免疫耐受期、免疫清除期、低（非）復制狀態(tài)、再激活期、正常對照組5組間比較CD4+T細胞百分率及CD4/CD8比值差異顯著（P<0.05，P<0.05），進一步進行組內比較發(fā)現：免疫清除期的CD4+T細胞百分率及CD4/CD8比值較低復制狀態(tài)明顯減低

4、（P<0.05，P<0.05）；免疫清除期及免疫耐受期的CD4+T細胞百分率、CD4/CD8比值均較正常對照組明顯減低（P<0.01，P<0.05， P<0.05，P<0.05）；其它組間比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。
　　 3.外周血T細胞亞群與外周血及肝組織中HBV-DNA定量的相關性分析。
　　 CD4/CD8比值與外周血HBV-DNA定量呈負相關（r=-0.308，P<0.05）。CD3+T細胞百分率

5、、CD4+T細胞百分率、CD8+T細胞百分率與外周血HBV-DNA定量無相關性。外周血T細胞亞群與肝組織中的HBV-DNA定量亦無相關性。在慢性HBV感染的不同階段，亦未發(fā)現T細胞亞群與HBV-DNA定量相關。
　　 4.肝組織中CD4、CD8陽性細胞的表達。
　　 正常肝組織中有少量CD4和CD8陽性細胞表達，慢性乙型病毒性肝炎患者的肝組織中可見CD4陽性及CD8陽性細胞表達，CD4陽性細胞主要集中在匯管區(qū)，CD8陽性

6、細胞主要聚集在匯管區(qū)及炎性肝細胞的周圍。
　　 5.CD4、CD8陽性細胞在HBV-DNA不同復制狀態(tài)肝組織中的表達。
　　 CD4、CD8陽性細胞在慢性HBV感染者肝組織中的表達明顯多于正常肝組織的陽性表達量（P<0.01，P<0.01）。CD4、CD8陽性細胞在HBV-DNA陽性組肝組織中的表達明顯多于正常對照組（P<0.001，P<0.001），也多于HBV-DNA陰性組，但是差異無統計學意義（P>0.05，P>0

7、.05）；CD8陽性細胞在HBV-DNA陰性組肝組織中的表達明顯多于正常對照組（P<0.01），但是CD4陽性細胞的表達在兩者間比較差異無統計學意義（P>0.05）。
　　 6.CD4陽性細胞在慢性HBV感染不同階段肝組織中的表達。
　　 免疫清除期、低復制狀態(tài)及再激活期3組CD4陽性細胞明顯多于正常對照組（P<0.001，P<0.001，P<0.001）。免疫耐受期CD4陽性細胞明顯低于免疫清除期及再激活期（P<0.0

8、5，P<0.01）。其余組間比較差異無統計學意義（P>0.05）。
　　 7.CD8陽性細胞在慢性HBV感染不同階段肝組織中的表達。
　　 慢性HBV感染的4個不同階段CD8陽性細胞均多于正常對照組（P<0.05，P<0.05，P<0.01 P<0.01）。CD8陽性細胞在免疫耐受期的表達明顯低于再激活期（P<0.05）。其余組間比較差異無統計學意義（P>0.05）。
　　 8.免疫活動期（免疫清除期和再激活期）

9、細胞免疫狀態(tài)的變化。
　　 肝組織中CD4、CD8陽性細胞的表達在此期明顯高于免疫耐受期（P<0.01，P<0.05），CD4陽性細胞在此期的表達明顯多于低復制狀態(tài)組（P<0.05），CD8陽性細胞在此期的表達也多于低復制狀態(tài)，但是差異無統計學意義（P>0.05）。
　　 外周血CD4+T細胞的百分率與外周血的HBV-DNA定量呈負相關（r=-0.481，P<0.05）。
　　 根據轉氨酶的升高情況分為小于2×U

10、LN（正常值上限）和大于2×ULN兩組，在ALT≥2×ULN組中外周血CD4/CD8比值與肝組織中的HBV-DNA定量呈顯著負相關（r=-0.829，P<0.05）。在小于2×ULN組中沒有發(fā)現類似變化。
　　 9.對外周血HBV-DNA定量與肝組織HBV-DNA定量進行Spearman相關分析。
　　 外周血HBV-DNA定量與肝組織HBV-DNA定量顯著正相關（r=0.779，P<0.001）。
　　 10.

11、肝組織及血清HBV-DNA的檢測。
　　 在血清HBV-DNA定量陽性的肝組織中均能檢測到HBV-DNA的復制，而且在8例低復制狀態(tài)組血清HBV-DNA陰性的肝組織內仍然可以檢測到HBV-DNA的復制。
　　 結論：
　　 1.慢性HBV感染時，機體及肝臟局部均存在免疫功能異常，HBV-DNA的復制加重了這種變化。本試驗發(fā)現HBV-DNA陽性組外周血的CD4+T細胞百分率及CD4/CD8比值明顯低于陰性組及正常對

12、照，HBV-DNA陽性組肝組織中浸潤的CD4、CD8陽性細胞明顯多于正常。
　　 2.慢性HBV感染的不同階段機體及肝臟局部所處的免疫狀態(tài)不同。免疫清除期外周血CD4+T細胞百分率及CD4/CD8比值明顯低于低復制狀態(tài)，免疫活動期肝內浸潤的CD4、CD8陽性細胞多于免疫耐受期及低復制狀態(tài)。
　　 3.CD4+T細胞的減少不利于病毒的清除，而病毒的持續(xù)高復制狀態(tài)可能影響了CD4+T細胞的增殖。在免疫活動期，外周血CD4+T