BDNF和SYN在形覺剝奪性弱視大鼠視皮層中的表達(dá).pdf

1、目的
　　本實驗通過視覺電生理檢測形覺剝奪大鼠的F-VEP,觀察短期形覺剝奪(7d)是否可以形成形覺剝奪性弱視大鼠模型。通過免疫組織化學(xué)方法檢測正常和形覺剝奪大鼠視皮層BDNF和SYN動態(tài)表達(dá),研究BDNF和SYN與年齡的相關(guān)性,及形覺剝奪對其表達(dá)的影響,探討B(tài)DNF和SYN與視覺發(fā)育和視覺經(jīng)驗的相關(guān)性,以期從分子水平為弱視的發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　方法
　　1.剛出生SPF級SD大鼠21只,雌雄不限,南華大學(xué)動物

2、實驗中心提供,隨機(jī)分7組,每組3只,分組情況:正常(N)組分NP14、NP21、NP45、NP120組,單眼剝奪(MD)組分MD21、MD45、MD120組。MD組大鼠生后14d行右眼眼瞼縫合(BS)術(shù),造成單眼形覺剝奪弱視模型。將 NP21和MD21大鼠于生后21d行閃光視覺誘發(fā)電位(F-VEP)檢測,記錄N1、P1、N2波潛時和N1P1、P1N2振幅。采用 SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件,應(yīng)用多變量方差分析(Multivariate

3、analysis of variance, MANOVA),比較多組均數(shù)向量。
　　2.大鼠飼養(yǎng)至所需天數(shù)時均處以腹麻,灌流,斷頭,取腦,固定。切取腦組織常規(guī)石蠟包埋,行4μm冠狀連續(xù)切片,切片進(jìn)行 Nissl染色和免疫組織化學(xué)方法染色。顯微鏡下觀察BDNF和SYN在視皮層的表達(dá)情況,Olympus顯微攝像系統(tǒng)采集圖片,圖像分析軟件進(jìn)行累計光密度(IOD)值測定。各組計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x±s)表示,采用SPSS17.0統(tǒng)計

4、分析軟件對 BDNF和SYN的IOD值進(jìn)行處理:發(fā)育不同時限多組間的比較采用單因素方差分析,相同時間段的組間差異采用獨立樣本的t檢驗,同組兩種蛋白表達(dá)的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析。
　　結(jié)果
　　1.F-VEP檢測:與正常和剝奪組大鼠未剝奪眼的F-VEP相比,剝奪組大鼠剝奪眼的F-VEP其N1、P1、N2波潛時延長,N1P1、P1N2波幅降低,差異有顯著性(P<0.01)。而前兩者的F-VEP相比較,差異無顯著性(P

5、>0.05)。
　　2.(1)Nissl染色:視皮層神經(jīng)元胞漿染色,見明顯的胞漿突起,核不著色,呈空泡狀,視皮質(zhì)中廣泛分布,分布呈現(xiàn)帶狀。與正常組比較,剝奪組對應(yīng)視皮層中神經(jīng)元數(shù)目略減少,體積大小不均,核著色稍加深。
　　(2)大鼠視皮層中BDNF的表達(dá):BDNF陽性反應(yīng)產(chǎn)物呈棕色顆粒狀,分布于神經(jīng)元胞漿及突起,視皮層各層廣泛分布。BDNF表達(dá)在 NP14時 IOD值為5.66±0.99, NP21為12.50±1.38,

6、NP45為12.10±1.56, NP120為4.62±0.90。整體組間差異有顯著性(P=0.000),發(fā)育時限對BDNF表達(dá)有影響,P21=P45>P14=P120。MD組大鼠視皮層BDNF表達(dá)較同時限NP組分布稀疏,數(shù)量減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義:MD21時IOD值為4.78±0.70(P=0.000), MD45其IOD值為4.86±0.65(P=0.000),MD120其IOD值為4.06±0.43(P=0.025)。BDNF表達(dá)

7、受異常視覺經(jīng)驗影響。
　　(3)大鼠視皮層中 SYN的表達(dá):SYN的陽性反應(yīng)產(chǎn)物呈棕黃色顆粒狀,位于前突觸,廣泛分布于視皮層各層,但神經(jīng)元胞體、血管、胼胝體均無表達(dá)。SYN表達(dá)在 NP14時IOD值為13.62±1.31,NP21為26.15±1.30,NP45為29.30±1.07,NP120為11.95±0.92。方差分析組間差異有顯著性(P=0.000), P45>P21>P14>P120(P=0.000)。SYN在正常視皮

8、層表達(dá),受發(fā)育時限影響,與視覺關(guān)鍵期一致。MD21時其IOD值為15.68±1.02, MD45為15.38±0.83, MD120為10.62±0.71。MD組SYN的表達(dá)均低于同時限NP組,差異有顯著性(P=0.000),SYN表達(dá)受視覺經(jīng)驗影響。
　　(4)BDNF和SYN表達(dá)相關(guān)關(guān)系:分別對NP組、MD組大鼠視皮層中BDNF和SYN的表達(dá)量(IOD值)行相關(guān)分析。NP組中二者呈顯著性正相關(guān)關(guān)系(r=0.927,P=0.00

9、0),MD組中二者呈顯著性正相關(guān)關(guān)系(r=0.574,P=0.000)。
　　結(jié)論
　　1.在大鼠視覺發(fā)育關(guān)鍵期,早期的短期形覺剝奪(7d)可以形成大鼠弱視模型。
　　2.BDNF和SYN在正常大鼠各個年齡段的視皮層中均有表達(dá),但表達(dá)量不一樣,呈年齡相關(guān)性,與視覺發(fā)育關(guān)鍵期的起始和終止時間相符,證實二者在生后的視覺系統(tǒng)發(fā)育過程中參與視覺中樞的發(fā)育和成熟。進(jìn)一步研究二者在大鼠弱視對應(yīng)視皮層中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)在視覺發(fā)育的關(guān)鍵期