甜菜夜蛾對(duì)昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑敏感性測(cè)定及蛻皮激素受體cDNA克隆.pdf

1、甜菜夜蛾(Spodopteraexigua)屬鱗翅目、夜蛾科，是一種世界性分布的多食性重要農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)，主要危害蔬菜、棉花和觀賞性植物等。由于一直依靠化學(xué)防治，甜菜夜蛾已對(duì)多種類(lèi)型農(nóng)藥產(chǎn)生抗性。昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑如蟲(chóng)酰肼和幾丁質(zhì)合成抑制劑類(lèi)殺蟲(chóng)劑是近年來(lái)防治甜菜夜蛾的主要替代農(nóng)藥。這類(lèi)殺蟲(chóng)劑對(duì)鱗翅目害蟲(chóng)都表現(xiàn)了高度的選擇性，對(duì)哺乳動(dòng)物、鳥(niǎo)、魚(yú)類(lèi)、其它脊椎動(dòng)物和各種天敵無(wú)毒害作用，是害蟲(chóng)綜合防治的重要優(yōu)選藥劑。害蟲(chóng)對(duì)藥劑都存在產(chǎn)生抗藥性的風(fēng)險(xiǎn)，為

2、了更有效地控制甜菜夜蛾的危害，掌握甜菜夜蛾對(duì)該類(lèi)殺蟲(chóng)劑的敏感性變化十分重要。 昆蟲(chóng)的蛻皮和變態(tài)受蛻皮激素和保幼激素的嚴(yán)格控制。蛻皮激素通過(guò)與蛻皮激素受體(EcR)和超氣門(mén)蛋白(USP)形成的異源二聚體相互作用，起動(dòng)包括轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)在內(nèi)的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而引起昆蟲(chóng)的蛻皮和變態(tài)。蟲(chóng)酰胼是一種新合成的非甾醇蛻皮激素類(lèi)殺蟲(chóng)劑，跟蛻皮激素一樣作用于蛻皮激素受體，引起昆蟲(chóng)早熟、致死性蛻皮；幾丁質(zhì)抑制劑類(lèi)殺蟲(chóng)劑則阻止幾丁質(zhì)的正常合成和轉(zhuǎn)運(yùn)，從而殺

3、死昆蟲(chóng)，兩者的作用機(jī)理完全不同。 多種昆蟲(chóng)蛻皮激素受體和超氣門(mén)蛋白基因的成功克隆為建立基于昆蟲(chóng)蛻皮激素受體的高通量篩選技術(shù)奠定了基礎(chǔ)，并且可以通過(guò)多種途徑實(shí)現(xiàn)。在細(xì)菌、酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞系等中表達(dá)的EcR和USP蛋白，無(wú)論其粗提液，還是純化蛋白，均可用于活性篩選。本研究克隆甜菜夜蛾EcR和USP基因的目的就是為建立活性篩選技術(shù)作準(zhǔn)備。 本文研究?jī)?nèi)容包括兩部分：甜菜夜蛾田間種群對(duì)昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑類(lèi)殺蟲(chóng)劑的敏感性測(cè)定和甜菜夜蛾蛻皮

4、激素受體和超氣門(mén)蛋白基因cDNA片段的克隆。研究結(jié)果如下： 用浸葉法測(cè)定了7種昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑類(lèi)殺蟲(chóng)劑對(duì)山東甜菜夜蛾田間種群的敏感性。監(jiān)測(cè)結(jié)果表明：不同甜菜夜蛾品系或種群對(duì)供試藥劑的敏感性均存在明顯差異。甜菜夜蛾敏感品系對(duì)供試藥劑的敏感性倍數(shù)為甲氧酰肼∶氟啶脲∶蟲(chóng)酰肼∶氟鈴脲∶氟蟲(chóng)脲∶抑食肼∶除蟲(chóng)脲為95.7∶40.1∶32.0∶13.4∶9.2∶3.1∶1；泰安范鎮(zhèn)、濰坊壽光及臨沂羅莊田間種群對(duì)供試藥劑的敏感性順序與甜菜夜蛾敏感

5、品系的敏感性順序基本一致。與敏感品系相比，3個(gè)甜菜夜蛾田間種群對(duì)同一種供試藥劑的敏感性均有不同程度的下降，其中對(duì)蟲(chóng)酰肼和氟啶脲的敏感性下降倍數(shù)達(dá)到3倍以上，表現(xiàn)出低水平抗藥性。 本研究利用RT-PCR技術(shù)獲得了長(zhǎng)度為495bp、480bp、471bp的3個(gè)EcR目的片段和595bp的USP目的片段，并且發(fā)現(xiàn)EcR基因表達(dá)過(guò)程中存在可變剪接現(xiàn)象。經(jīng)序列分析，克隆的EcR和USP目的片段對(duì)應(yīng)氨基酸序列與草地夜蛾相應(yīng)序列的同源性最高，