野生與栽培丹參化學成分分析研究.pdf

1、丹參為唇形科植物丹參Salviamiltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖。性苦,微寒,歸心、肝經(jīng)。具祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩的作用,主治冠心病、心絞痛、心煩不眠、月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉痛經(jīng)等癥。為保證臨床用藥安全有效,使臨床用藥更為科學合理,本課題采用分析手段對19份野生與栽培丹參樣品的水溶性成分和脂溶性成分進行了薄層鑒別、含量測定、指紋圖譜的比較研究。
　　 1.丹參樣品的采集
　　 采集和收集了從山東、河北、陜西

2、、四川、江蘇、湖北地區(qū)丹參樣品19份,其中野生品6份,栽培品13份。
　　 2.薄層鑒別比較研究
　　 采用藥典方法對丹參脂溶性成分丹參酮ⅡA和水溶性成分丹酚酸B進行了薄層鑒別實驗。由脂溶性成分薄層色譜圖可以看出,不同產(chǎn)地之間丹參的斑點數(shù)目和斑點大小差異很大。栽培品中山東莒縣康山,山東平邑產(chǎn)丹參中丹參酮ⅡA含量最高,野生品中河北承德產(chǎn)丹參中丹參酮ⅡA含量最高。野生與栽培樣品含量對比研究結(jié)果表明,山東平邑產(chǎn)和山東文登產(chǎn)丹參

3、栽培品含量比野生品中丹參酮ⅡA含量高；河北承德產(chǎn)丹參野生與栽培品中丹參酮ⅡA含量就斑點大小來看含量相當,三對野生品與栽培品圖譜對比研究還發(fā)現(xiàn)野生品比栽培品在丹參酮ⅡA斑點上方多一個斑點。由水溶性成分薄層色譜圖總體來看產(chǎn)地之間差異沒有脂溶性成分產(chǎn)地之間差異那么明顯。野生與栽培樣品斑點對比來看,相似度很高。
　　 3.化學成分含量比較研究
　　 丹參的化學成分主要為脂溶性二萜醌類和水溶性酚酸類。脂溶性成分為抗菌消炎的主要成分

4、,水溶性成分為活血化瘀的主要成分,臨床應用不同。在本課題中,我們采用了UV法測定總成分含量和HPLC方法測定各單個成分的含量來分析野生與栽培丹參中化學成分含量的差異。
　　 3.1紫外—分光光度法測定丹參中總丹參酮的含量
　　 本文建立了以丹參酮ⅡA為對照品,紫外一分光光度法測定不同產(chǎn)地野生與栽培丹參中總丹參酮的含量。丹參酮ⅡA回歸方程為:A=107.77C—0.0494(r=0.9997),線性范圍C:1.07—21.

5、4μg/mL,回收率為97.53％,RSD=1.49％。方法學考察結(jié)果表明本法簡便、準確、重復性好。
　　 實驗結(jié)果表明,栽培品丹參中總丹參酮含量范圍為2.26—4.00％之間,野生品丹參的含量范圍為2.32—4.31％之間；從三對野生與栽培丹參總丹參酮含量對比研究結(jié)果來看,三對中有兩對野生品含量高于栽培品,由此我們可以粗略的推斷野生品中總丹參酮含量可能高于栽培品中總丹參酮含量。
　　 3.2紫外—分光光度法測定丹參中總

6、丹酚酸的含量
　　 本文建立了以丹酚酸B為對照品,用紫外分光光度法測定不同產(chǎn)地野生與栽培丹參中總丹酚酸的含量。丹酚酸B線性方程為:A=9.9362C—0.009(r=0.9999),線性范圍C:2.56—102.4μg/mL,回收率為97.96％,RSD為1.54％。方法學考察結(jié)果表明本法簡便、準確、重復性好。
　　 實驗結(jié)果表明,栽培品丹參中總丹酚酸含量范圍在13.99—30.16％之間,野生品中總丹酚酸含量范圍在15

7、.79—20.06％之間；從三對野生與栽培丹參中總丹酚酸含量對比研究結(jié)果來看,河北承德組結(jié)果表明野生丹參中總丹酚酸含量高于栽培丹參中總丹酚酸含量,而山東平邑組中栽培品中總丹酚酸含量較野生品中總丹酚酸含量高,山東文登組中栽培品與野生品中總丹酚酸含量相當,就現(xiàn)有樣本來看無法推斷丹參栽培品與野生品中總丹酚酸含量的高低。
　　 3.3 HPLC法測定丹參中三種丹參酮的含量
　　 本文建立了丹參藥材中丹參酮ⅡA,丹參酮Ⅰ,隱丹參酮

8、的HPLC同時含量測定方法。色譜柱為Kromasil C18RP(4.6mm×250mm,5μm),甲醇-水(72:28)為流動相,檢測波長為270nm,柱溫25℃,流速:1.2mL/min。丹參酮ⅡA在0.0222—0.4440μg范圍內(nèi)(r=0.9999)；丹參酮Ⅰ在0.0214-0.4280μg范圍內(nèi)(r=0.9999)；隱丹參酮在0.0222—0.4440μg范圍內(nèi)(r=0.9999)線性關系良好。丹參酮ⅡA,丹參酮Ⅰ,隱丹參酮

9、的回收率分別為101.68％,101.81％,99.92％:RSD=1.41％,RSD=1.70％,RSD=1.99％。
　　 不同產(chǎn)地野生與栽培丹參藥材含量測定結(jié)果表明:栽培品中隱丹參酮含量范圍在0.05—0.27％之間,丹參酮Ⅰ含量范圍在0.02—0.27％之間,丹參酮ⅡA含量范圍在0.0091-0.82％之間:野生品隱丹參酮含量范圍在0.07-0.96％之間,丹參酮Ⅰ含量范圍在0.0096-0.27％之間,丹參酮ⅡA含量范

10、圍在0.24-1.27％之間。從野生與栽培丹參中三種丹參酮成分含量比較來看,野生品三種丹參酮含量均高于栽培品的含量,所以我們可以粗略的推斷野生品優(yōu)于栽培品中丹參酮含量。
　　 3.4丹參藥材中丹酚酸B的HPLC含量測定
　　 本文采用藥典方法對不同產(chǎn)地野生與栽培丹參藥材中丹酚酸B進行了含量測定,結(jié)果表明不同產(chǎn)地栽培丹參藥材中丹酚酸B含量范圍在5.34％-11.55％之間,野生丹參中丹酚酸B含量范圍在7.54-11.88％

11、之間。不同產(chǎn)地之間丹參中丹酚酸B的含量差異很大,從野生與栽培對比研究結(jié)果來看,丹酚酸B含量總體來看我們可以粗略的推斷野生品中丹酚酸B含量高于栽培品中丹酚酸B含量。
　　 3.5丹參中原兒茶醛的HPLC法含量測定
　　 本文采用藥典方法對不同產(chǎn)地野生與栽培丹參藥材中原兒茶醛進行了含量測定,結(jié)果表明不同產(chǎn)地栽培丹參藥材中原兒茶醛含量范圍在0.015％-0.295％之間,野生丹參中原兒茶醛含量范圍在0.030％-0.123％之

12、間。不同產(chǎn)地之間原兒茶醛含量差異很大,栽培品中山東菏澤產(chǎn)丹參中原兒茶醛含量最高,野生品中河北承德產(chǎn)丹參中原兒茶醛含量最高。從野生與栽培對比研究結(jié)果來看,原兒茶醛含量總體來看我們可以粗略的推斷野生品中原兒茶醛含量高于栽培品中原兒茶醛含量。
　　 4.指紋圖譜對比研究
　　 4.1野生與栽培丹參水溶性成分指紋圖譜對比研究
　　 通過與對照品色譜峰的保留時間對比,鑒定了丹參藥材水溶性指紋圖譜中3個峰,分別為丹參素,原兒

13、茶醛,丹酚酸B。各個產(chǎn)地的樣品均有丹參素、原兒茶醛、丹酚酸B色譜峰。采用國家藥典委員會推薦的中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2004A),將實驗數(shù)據(jù)導入中藥指紋圖譜相似度計算軟件,選定七個特征峰,設定匹配參照圖譜,將譜峰自動匹配,通過中位數(shù)矢量計算得出丹參樣品指紋圖譜的相似度。野生丹參藥材不同產(chǎn)地之間相似度很高,均在0.9以上；栽培丹參藥材不同產(chǎn)地之間除了山東平邑的相似度只有0.791外,其余的各產(chǎn)地之間相似度也都很高。從栽培與野生圖譜

14、看不同產(chǎn)地野生和栽培藥材含有六個共有色譜峰,但色譜峰峰面積有差異,不同產(chǎn)地丹參指紋圖譜的8號色譜峰差異顯著。
　　 野生與栽培對照指紋圖譜對比研究,利用相似度計算軟件進行分析,結(jié)果表明二者相似度很高在0.99以上,野生與栽培整體來講無明顯差異。
　　 4.2野生與栽培丹參脂溶性成分指紋圖譜對比研究
　　 通過與對照品色譜峰的保留時間,鑒定了丹參藥材脂溶性指紋圖譜中4個峰,分別為二氫丹參酮Ⅰ,隱丹參酮,丹參酮Ⅰ,丹

15、參酮ⅡA。各個產(chǎn)地的樣品均有二氫丹參酮Ⅰ,隱丹參酮,丹參酮Ⅰ,丹參酮ⅡA4個色譜峰。采用國家藥典委員會推薦的中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2004A),將實驗數(shù)據(jù)導入中藥指紋圖譜相似度計算軟件,選定五個特征峰,設定匹配參照圖譜,將譜峰自動匹配,通過中位數(shù)矢量計算得出丹參樣品指紋圖譜的相似度。由相似度計算結(jié)果看,栽培丹參藥材不同產(chǎn)地之間相似度相差很大,而野生丹參藥材產(chǎn)地之間相似度很高在0.9以上,由此可以看出栽培丹參不同產(chǎn)地之間質(zhì)量有差

16、異,而野生丹參產(chǎn)地之間無明顯差異,從野生與栽培丹參各自脂溶性成分和水溶性成分的指紋圖譜疊加圖也可以看出這一點。
　　 野生與栽培對照指紋圖譜對比研究,利用相似度計算軟件進行分析,結(jié)果表明二者相似度很高,野生與栽培整體來講無明顯差異。
　　 5.小結(jié)
　　 綜上所述,通過對栽培和野生丹參中丹參酮ⅡA薄層色譜比較研究,結(jié)果表明不同產(chǎn)地之間丹參的斑點數(shù)目和大小差異很大。從三對樣品可以看出栽培品中丹參酮ⅡA含量高于野生品

17、中丹參酮ⅡA含量,野生品與栽培品圖譜對比研究還發(fā)現(xiàn)野生品比栽培品在丹參酮ⅡA斑點上方多一個斑點。而對水溶性丹酚酸B的比較研究結(jié)果表明野生與栽培丹參在水溶性成分上差異不明顯。
　　 通過對栽培和野生丹參兩類總成分和五個單一化學成分含量比較研究,結(jié)果表明栽培丹參和野生丹參的化學成分含量上存在差異,就現(xiàn)有樣本粗略推斷野生品質(zhì)量優(yōu)于栽培品。
　　 從野生品共有指紋圖譜和栽培品共有指紋圖譜比較結(jié)果看,栽培丹參和野生丹參色譜峰的數(shù)目

18、基本相同,只是峰面積存在差異:從野生品與栽培品產(chǎn)地之間指紋圖譜對比來看,產(chǎn)地之間圖譜差異較大,主要為含量差異。其中水溶性指紋圖譜從色譜峰總數(shù)和峰面積來看均差異不明顯；脂溶性成分指紋圖譜中產(chǎn)地成分差異較明顯,其中四川中江樣品尤為明顯,其圖譜中14號峰為其它產(chǎn)地含量甚微的色譜峰,值得進一步研究其為何種成分及產(chǎn)生這一變化的因為(是否為貯藏或其它因為造成成分轉(zhuǎn)化而來)。
　　 創(chuàng)新點:1.本文首次對多樣本運用多成分含量測定(兩類總成分和