江蘇省沿海地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖主要致病菌耐藥性研究.pdf

1、江蘇省沿海地區(qū)海、淡水資源豐富，養(yǎng)殖池塘眾多，灘涂廣闊，是我國重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖基地。近些年，細菌性疾病在江蘇省沿海地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖中普遍發(fā)生，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的損失。為了預防和控制細菌性疾病，水產(chǎn)養(yǎng)殖從業(yè)人員經(jīng)常使用各種抗菌藥物，一定程度地對控制疾病起到了較好的作用。但由于在養(yǎng)殖生產(chǎn)上藥物的使用缺乏科學性，部分抗菌藥物在水產(chǎn)養(yǎng)殖上使用后出現(xiàn)了耐藥現(xiàn)象，一方面影響了產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，另一方面也威脅著水產(chǎn)品的質(zhì)量安全和水生態(tài)環(huán)境。
　　

2、為了解江蘇省沿海地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖致病菌的耐藥性狀況，本研究以江蘇省沿海地區(qū)發(fā)病和健康水生動物為對象分離獲得了377株細菌，經(jīng)形態(tài)學、生理生化和16S rRNA序列比對的方法鑒定，其中曾報道為水產(chǎn)養(yǎng)殖致病性細菌的有274株。來源分布為：連云港地區(qū)46株，鹽城地區(qū)89株，南通地區(qū)116株；海水菌64株，淡水菌210株；魚類菌150株，甲殼類菌99株。其中常見水產(chǎn)養(yǎng)殖主要致病菌187株，包括氣單胞菌90株，弧菌54株，假交替單胞菌22株，美人魚發(fā)

3、光桿菌7株和不動桿菌14株。
　　利用K-B紙片擴散和微量肉湯稀釋法對江蘇省沿海地區(qū)分離的水產(chǎn)養(yǎng)殖致病菌進行抗菌藥物敏感性監(jiān)測。紙片擴散試驗結果發(fā)現(xiàn)江蘇省沿海地區(qū)的水產(chǎn)養(yǎng)殖主要致病菌對磺胺異噁唑、青霉素、強力霉素和四環(huán)素表現(xiàn)較強耐藥性，耐藥率分別為66.06％、64.23%、32.12%和30.66%；對環(huán)丙沙星、氧氟沙星、恩諾沙星、新霉素、頭孢曲松、紅霉素、諾氟沙星和氟苯尼考耐藥率較低，依次為5.84%、3.65%、6.57%、

4、5.11%、6.57%、8.03%、9.49%。肉湯稀釋法結果表明79.07%水產(chǎn)養(yǎng)殖致病菌對阿莫西林的MIC達到甚至超過32μg/mL，96.12%的菌株對硫酸二甲嘧啶的MIC達到甚至超過128μg/mL，表現(xiàn)出較高耐藥性。江蘇省沿海地區(qū)分離的部分水產(chǎn)養(yǎng)殖致病菌出現(xiàn)多重耐藥，二重、三重、四重、五重耐藥率分別為22.3%、13.5%、10.9%、6.6%，甚至出現(xiàn)十一重耐藥的菌株。江蘇省沿海地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖致病菌耐藥性整體上表現(xiàn)出由南向北逐

5、漸增強，淡水源菌株高于海水源菌株，魚源菌株比甲殼類菌株嚴重的規(guī)律。
　　通過PCR方法對江蘇省沿海地區(qū)90株水產(chǎn)源氣單胞菌耐藥基因進行擴增，研究了各耐藥基因的檢出率，統(tǒng)計了該地區(qū)不同種類藥物的耐藥基因型，初步分析了不同基因型與耐藥表型間的關系。結果發(fā)現(xiàn)，江蘇省沿海地區(qū)90株水產(chǎn)源氣單胞菌β-內(nèi)酰胺耐藥基因TEM、IMP、AmpC、OXA-23、OXA-24檢出率分別為0、6.67%、41.11%、4.44%和24.44%，共出現(xiàn)8

6、種耐藥基因型，其中攜帶IMP基因型的菌株75%對青霉素耐藥，攜帶AmpC和OXA-24基因型的菌株92.86%表現(xiàn)耐藥，其他基因型菌株100%表現(xiàn)耐藥。另有部分菌株未檢測到β-內(nèi)酰胺耐藥基因，但對青霉素表現(xiàn)較強耐藥，說明在該地區(qū)水產(chǎn)致病菌中介導青霉素耐藥的還存在其他基因。氨基糖苷類耐藥基因aph(3')-Ia、aac(6')-Ib、ant(3'')-Ia和ant(3'')-Ia檢出率分別為28.89%、67.78%、32.22%和8.8

7、9%，共有11個氨基糖苷類耐藥基因型。試驗菌株對新霉素敏感性較高，分析介導氨基糖苷類耐藥機制可能是多個基因共同作用的結果?；前奉惸退幓騭ul1、sul2和sul3攜帶率分別為34.44%、28.89%和45.56%，主要有sul1、sul2、sul3、sul1/sul2、sul1/sul3、sul2/sul3、sul1/sul2/sul3七種基因型，相應基因型菌株對磺胺異噁唑耐藥率分別為90%、60%、48%、90%、77.78%、7

8、5%和100%。四環(huán)素類耐藥基因tetA、tetC和tetM檢出率分別為32.22%、34.44%和60%，共有tetA、tetC、tetM、tetA/tetC、tetA/tetM、tetC/tetM和tetA/tetC/tetM七種基因型，分別有75%、33.33%、22.73%、0%、66.67%、33.33%和36.36%的菌株表現(xiàn)對強力霉素耐藥，75%、33.33%、27.27%、100%、41.67%、33.33%和27.27

9、%的菌株表現(xiàn)對四環(huán)素耐藥。tetA和tetM基因的攜帶率與耐藥表型無明顯相關性，四環(huán)素類不同藥物品種的主要耐藥基因型存在一定差異。氟苯尼考耐藥基因floR檢出率為76.67%，但攜帶floR基因的菌株并沒有表現(xiàn)出較明顯的耐藥性，推測floR基因介導氟苯尼考較低水平耐藥。喹諾酮類耐藥基因qnrA、qnrB、qnrB-24、qnrS和qepA檢出率分別為3.33%、52.22%、46.67%、26.67%和53.33%，共出現(xiàn)14個喹諾酮類

10、耐藥基因型，但未發(fā)現(xiàn)耐藥表型與耐藥基因型間存在較密切的關系，分析認為介導喹諾酮類藥物耐藥可能還與其他基因有關。
　　綜上所述，江蘇省沿海地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖中條件致病菌較多且分布廣泛，其對抗菌藥物產(chǎn)生不同程度的耐藥性，特別是對青霉素、磺胺異噁唑、強力霉素和四環(huán)素等耐藥較為嚴重，耐藥性在淡水魚類品種上表現(xiàn)尤為突出。建議該地區(qū)在防治水產(chǎn)細菌性病害過程中做到科學用藥，防止藥物的耐藥性進一步增強。江蘇省沿海地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖氣單胞菌耐藥基因和基因型多樣