利拉魯肽對高脂喂養(yǎng)大鼠胰島素抵抗和骨骼肌脂質(zhì)沉積的影響及相關(guān)機制的探討.pdf

1、目的：胰高血糖素樣多肽-1(GLP-1)是進食時由腸道內(nèi)分泌細(xì)胞L細(xì)胞分泌的腸道激素，它能夠調(diào)節(jié)攝食后機體的代謝反應(yīng)，比如抑制食欲、穩(wěn)定血糖、調(diào)節(jié)腸道動力等。GLP-1受體激動劑利拉魯肽是目前研發(fā)的新型降糖藥物，以葡萄糖濃度依賴模式刺激胰島素的分泌，進而降低血糖。與傳統(tǒng)降糖藥物比較，低血糖、體重增加等不良事件發(fā)生率明顯降低，為糖尿病的治療帶來了新希望。2型糖尿病患病率明顯增加，而胰島素抵抗（IR）是2型糖尿病的病理基礎(chǔ)之一，有研究發(fā)現(xiàn)利

2、拉魯肽可改善胰島素抵抗，但機制尚未明確。本研究通過給予高脂喂養(yǎng)大鼠不同濃度利拉魯肽進行干預(yù)，觀察其對大鼠胰島素敏感性、骨骼肌脂質(zhì)沉積的影響；通過測定胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中蛋白激酶B(AKT)與葡萄糖轉(zhuǎn)運體-4（GLUT-4）mRNA和蛋白表達及脂肪酸轉(zhuǎn)運和氧化因子脂肪酸轉(zhuǎn)位酶（FAT/CD36）與肉堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶1（CPT1）mRNA和蛋白表達，探討利拉魯肽改善IR的新機制，為利拉魯肽的臨床應(yīng)用提供新的理論基礎(chǔ)。
　　方法：雄性W

3、istar大鼠230-260g，54只，分為普通飼料喂養(yǎng)16只與高脂飼料喂養(yǎng)38只，不同飼料喂養(yǎng)8周末，各取5只大鼠行高胰島素-正葡萄糖鉗夾試驗測定大鼠IR狀態(tài)，判定造模成功后，將高脂飼養(yǎng)大鼠分為高脂組(HF)、干預(yù)組1(L100)、干預(yù)組2(L200)，各組11只。11只普通飼料為對照組(NC)。對照組和高脂組：生理鹽水皮下注射；干預(yù)組1：利拉魯肽100ug/(kg·d)皮下注射；干預(yù)組2：利拉魯肽200ug/(kg·d)皮下注射。藥

4、物干預(yù)2周后，各組取5只大鼠行鉗夾試驗計算葡萄糖輸注率（GIR）和口服糖耐量實驗計算大鼠葡萄糖曲線下面積（AUC）。各組其余6只大鼠稱體質(zhì)量，腹主動脈取血測定血清空腹血糖（FBG）、空腹胰島素（FINS）、游離脂肪酸（FFA）、總膽固醇（TCH）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C），并留取骨骼肌標(biāo)本，測定骨骼肌中的甘油三酯（mTG）和長鏈脂肪酰輔酶A（LCA CoA），行透射電鏡觀察骨骼

5、肌超微結(jié)構(gòu)以及應(yīng)用Realtime-PCR、Wester n blot技術(shù)測定骨骼肌中FAT/CD36、CPT-1、PKB和GLUT-4mRNA及蛋白水平的表達情況。
　　結(jié)果：
　　1、四組大鼠一般情況的比較
　　與對照組比較，高脂組大鼠體質(zhì)量、FBG、FINS、FFA、TCH、TG、LDL-C、mTG、LCACoA增加（P<0.05或P<0.01）；與高脂組比較，干預(yù)組1大鼠TG、mTG、FFA、LCACoA下降（

6、P<0.05），干預(yù)組2大鼠體質(zhì)量、FBG、FINS、FFA、TCH、TG、LDL-C、mTG、LCACoA均明顯下降（P<0.05或P<0.01）；與干預(yù)組1相比，干預(yù)組2大鼠 FFA、mTG、LCACoA含量減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。
　　2、四組大鼠葡萄糖輸注率（GIR）的比較
　　藥物干預(yù)前：與對照組比較，高脂組大鼠GIR明顯下降（P<0.01）。利拉魯肽干預(yù)2周后，與對照組比較，高脂組G

7、IR明顯下降（P<0.01）；與高脂組比較，干預(yù)組1和干預(yù)組2大鼠GIR升高（P<0.01）；與干預(yù)組1比較，干預(yù)組2大鼠GIR增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　3、四組大鼠口服糖耐量實驗（OGTT）結(jié)果的比較
　　與對照組比較，高脂組大鼠各點血糖均升高，AUC增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；與高脂組比較，干預(yù)組2大鼠各點血糖和AUC均下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）,干預(yù)組1大鼠各點

8、血糖與AUC有下降趨勢，但僅120min與AUC血糖差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；與干預(yù)組1大鼠比較，干預(yù)組2大鼠在0min、120min血糖和AUC下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　4、四組大鼠電鏡結(jié)果
　　對照組大鼠骨骼肌細(xì)胞質(zhì)內(nèi)無脂滴，線粒體、肌絲條紋清晰；高脂組大鼠胞漿內(nèi)脂滴較多，線粒體腫脹，甚至出現(xiàn)空泡化，部分肌絲出現(xiàn)溶解。干預(yù)組1與干預(yù)組2大鼠骨骼肌脂滴減少、線粒體結(jié)構(gòu)較為清晰，但與對照組大鼠相比

9、肌絲仍有部分溶解，線粒體輕微腫脹。
　　5、四組大鼠骨骼肌FAT/CD36、CPT-1以及AKT、GLUT-4mRNA表達水平的結(jié)果比較
　　與對照組比較，高脂組大鼠骨骼肌FAT/CD36mRNA表達升高，CPT-1以及AKT、GLUT-4mRNA表達下降（P<0.01）；與高脂組比較，干預(yù)組1和干預(yù)組2大鼠骨骼肌FAT/CD36 mRNA表達下降、CPT-1以及AKT、GLUT-4mRNA表達均上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<

10、0.05或P<0.01）；與干預(yù)組1比較，干預(yù)組2大鼠骨骼肌CPT-1、AKT、GLUT-4mRNA表達進一步上升， FAT/CD36mRNA表達進一步下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。
　　6、四組大鼠骨骼肌FAT/CD36、CPT-1以及AKT、GLUT-4蛋白表達結(jié)果比較
　　與對照組比較，高脂組大鼠骨骼肌FAT/CD36蛋白表達升高、CPT-1以及AKT、GLUT-4蛋白表達下降（P<0.01）；

11、與高脂組比較，干預(yù)組1和干預(yù)組2大鼠骨骼肌FAT/CD36蛋白表達均下降、CPT-1以及AKT、GLUT-4蛋白表達均上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）；與干預(yù)組1比較，干預(yù)組2大鼠骨骼肌CPT-1、AKT、GLUT-4蛋白表達上升，F(xiàn)AT/CD36蛋白表達下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。
　　7、相關(guān)分析研究結(jié)果：
　　GIR與FINS、FFA、mTG、LCACoA明顯負(fù)相關(guān)，（r值

12、分別為-0.7842、-0.5241、-0.5371、-0.7091，P<0.05或P<0.01）。骨骼肌中LCACoA與FAT/CD36mRNA表達呈正相關(guān)（r=0.841,P<0.01），與CPT-1mRNA表達負(fù)相關(guān)（r=-0.6441,P<0.01），與GLUT-4mRNA表達的量呈負(fù)相關(guān)（r=-0.578,P<0.01）。AKT、GLUT-4mRNA表達的量與GIR呈明顯正相關(guān)（r=0.8740、0.7139, P<0.01）

13、。
　　結(jié)論：
　　1、高脂飲食可使大鼠發(fā)生糖脂代謝紊亂和骨骼肌異位脂質(zhì)沉積增加，誘發(fā)胰島素抵抗和糖耐量減低。
　　2、利拉魯肽呈濃度依賴性改善高脂喂養(yǎng)大鼠糖脂代謝紊亂、減少骨骼肌脂質(zhì)沉積以及減輕IR。
　　3、利拉魯肽呈濃度依賴性對高脂喂養(yǎng)大鼠骨骼肌脂肪酸相關(guān)轉(zhuǎn)運因子FAT/CD36和相關(guān)氧化因子CPT-1表達進行調(diào)控，減少肌細(xì)胞對脂肪酸的攝入并加速胞內(nèi)脂質(zhì)的氧化，進而減少骨骼肌內(nèi)脂質(zhì)沉積。與此同時上調(diào)胰島素信