間斷高濃度葡萄糖對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及一氧化氮、內(nèi)皮素合成的影響.pdf

1、目的：糖尿病慢性血管并發(fā)癥是2型糖尿病致死致殘的主要原因，而內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)與損傷是糖尿病慢性血管并發(fā)癥的始動環(huán)節(jié)，高血糖是糖尿病患者糖代謝紊亂的標(biāo)志之一，也是導(dǎo)致慢性血管并發(fā)癥的高危因素。體外研究表明，高濃度葡萄糖可損傷內(nèi)皮細(xì)胞。然而，以前研究觀察的是恒定性高濃度葡萄糖的效應(yīng)。正常人由于存在完善的神經(jīng)體液訓(xùn)節(jié)機(jī)制，血糖被嚴(yán)格控制在正常范圍內(nèi)，但糖尿病忠者的血糖在一天中會出現(xiàn)頻繁波動。臨床研究發(fā)現(xiàn)，旨在控制波動性高血糖的胰島素強(qiáng)化治療可

2、明顯降低糖尿病患者心血管事件的發(fā)生，提示波動性高血糖可能在糖尿病大血管并發(fā)癥的發(fā)生中有著極其重要的病理學(xué)意義。本研究通過對比研究間斷高濃度葡萄糖與恒定性高濃度葡萄糖對體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）的凋亡，調(diào)控基因bax、bcl-2的表達(dá)及血管舒、縮因子一氧化氮（NO）、內(nèi)皮素（ET-1）合成的影響，從而探討葡萄糖濃度波動在糖尿病慢性血管并發(fā)癥中的發(fā)病機(jī)制。
　　 方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分組如下：正常對照組

3、（NG組）（葡萄糖濃度為5.55 mmol/L）；恒定高葡萄糖組（HG組）（葡萄糖濃度為25 mmol/L）；間斷高葡萄糖組（FG組）（葡萄糖濃度為5.55 mmol/L與葡萄糖濃度為25 mmol/L兩種條件培養(yǎng)液，每8h更換一次）；每間隔8h更換新鮮條件培養(yǎng)液一次，一共作用72h。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率及相關(guān)調(diào)控基因bax、bcl-2表達(dá)，硝酸還原酶法測定內(nèi)皮細(xì)胞合成的血管舒張因子NO含量，放射免疫分析法測定內(nèi)皮細(xì)胞合成的血管收縮

4、因子ET-1含量。
　　 結(jié)果：（1）恒定性高濃度葡萄糖（25 mmol/L）與間斷高葡萄糖（5.55/25 mmol/L）作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞72h后，與正常對照組相比，兩組內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率均增高，分別為（8.10±0.10）％（P<0.001）、（10.20±0.20）％（P<0.001），以間斷高葡萄糖組增高幅度尤為明顯，與恒定性高濃度葡萄糖組比較，有顯著性差異（P<0.001）。
　　 （2）恒定性高濃度葡萄糖（

5、25 mmol/L）與間斷高葡萄糖（5.55/25 mmol/L）作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞72h后，與正常對照組相比，兩組內(nèi)皮細(xì)胞凋亡促凋亡基因bax表達(dá)均增高，（以熒光指數(shù)fluorimetric index，F(xiàn)I表示其相對含量）分別為1.13±0.021，（P<0.001）、1.34±0.020（P<0.001），以間斷高葡萄糖組增高幅度尤為明顯，與恒定性高濃度葡萄糖組比較，有顯著性差異（P<0.001）。
　　 （3）恒定性

6、高濃度葡萄糖（25 mmol/L）與間斷高葡萄糖（5.55/25 mmol/L）作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞72h后，與正常對照組相比，兩組內(nèi)皮細(xì)胞凋亡抑凋亡基因bcl-2表達(dá)均減少，（以熒光指數(shù)fluorimetric index，F(xiàn)I表示其相對含量）分別為0.90±0.059，（P<0.001）、0.79±0.062（P<0.001），以間斷高葡萄糖組減少幅度尤為明顯，與恒定性高濃度葡萄糖組比較，有顯著性差異（P<0.001）。
　

7、　 （4）恒定性高濃度葡萄糖（25 mmol/L）與間斷高葡萄糖（5.55/25 mmol/L）作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞72h后，與正常對照組相比，兩組內(nèi)皮細(xì)胞NO合成均減少，分別為（13.50±2.00）μmol/L，（P<0.001），（18.10±3.70）μmol/L，（P<0.001），以間斷高葡萄糖組減少幅度尤為明顯，與恒定性高濃度葡萄糖組比較，有顯著性差異（P<0.001）。
　　 （5）恒定性高濃度葡萄糖（25

8、mmol/L）與間斷高葡萄糖（5.55/25 mmol/L）作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞72h后，與正常對照組相比，兩組內(nèi)皮細(xì)胞ET-1合成均增多，分別為（2.70±0.50）pg/μg Protein（P<0.001）、（3.50±0.50）pg/μgProtein（P<0.001），以間斷高葡萄糖組增高幅度尤為明顯，與恒定性高濃度葡萄糖組比較，有顯著性差異（P<0.001）。
　　 結(jié)論：1、間斷高濃度葡萄糖相對于恒定性高濃度葡萄