胃癌高發(fā)區(qū)浙江省岱山縣幽門螺桿菌cag PAI的分布.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文胃癌高發(fā)區(qū)浙江省岱山縣幽門螺桿菌cagPAI的分布姓名：劉海燕申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：方平楚200405012004加歹#Z掌碩士學(xué)位論文⑦泌系統(tǒng)的通道，缺失ORFIO雕jHpylori突變株不能轉(zhuǎn)J重_CagA，但仍能誘導(dǎo)胃上皮細(xì)胞合成和分泌細(xì)胞因子IL8。由于cagA、cagM、cagT、ORFl3和ORFl0具有重要的功能，且在cagPAI內(nèi)的分布具有一定的間距，可能可以作為檢測完整cagP

2、Al的依據(jù)。為此，本實(shí)驗用PCR方法分別檢測TcagIt的cagA、cagM以及cagII上的cagT、ORFl3IIORFlO基因，以，鰓胃癌高發(fā)區(qū)浙江省岱山縣HpyloritagPAl的分布并分析各基因與胃十二指腸疾病類型的關(guān)系及與杭州市且py，。一的差異。材料和方法收集岡胃部不適接受胃鏡檢查患者的胃粘膜標(biāo)本，進(jìn)行Hpylori分離培養(yǎng)，其中岱III縣分離培養(yǎng)得到Hprioril24株，患者中男性90，JJ，女性34例，年齡16—7

3、l歲，平均427歲，經(jīng)胃鏡及病理檢查確診為慢性胃炎60例，消化性潰瘍59例，胃腺癌5例；杭州市分離培養(yǎng)得到Hpylori47株，患者中男性25例，女性22例，年齡2467歲，平均433歲，經(jīng)胃鏡及病理檢查證實(shí)為慢性胃炎4l例，消化性潰瘍6例。將患者胃粘膜組織研磨后涂布在ECY選擇性培養(yǎng)基上，370|C微需氧(5％02，10％C02，85％N2)培養(yǎng)5天，選擇有典型Hpylori菌落生長、快速尿素酶試驗陽性、氧化酶試驗陽性、革蘭染色鏡檢為

4、革蘭陰性、形態(tài)呈螺桿狀或飛鳥狀者為Hpylori，進(jìn)一步傳代培養(yǎng)2天擴(kuò)增細(xì)菌。用標(biāo)準(zhǔn)酚／氯仿抽提法提取Hpylori的基因組DNA，根據(jù)文獻(xiàn)報道的引物，進(jìn)行PCRj：f增，反應(yīng)參數(shù)為956C預(yù)變性3rain，隨1舌94。C30s、56。C30s、72。C45s共30個循環(huán)，最后72。C延JfQ7min。用瓊脂糖凝膠電泳法將PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳以檢測Hpyloril臨床分離株cagA、cagM、cagT、ORFl3和ORFIO的陽性情況。實(shí)

5、驗結(jié)果采用r檢驗(SPSSll5)，P005認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果和討論HpyloricagA、cagM、cagT、ORFl3和oRFlo的陽性率：岱山縣分別為1000％、823％、968％、944％和992％；杭州市分別為100O％、936％、979％、957％和100％。岱山縣cagA陽性的菌株中，823％可能具有完整cagPAI，完整tagPAI在消化性潰瘍、慢性胃炎和胃癌患者的檢出率分別為847％、80O％NsoO％；杭州市c