心房組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)重構(gòu)與心房纖顫關(guān)系的研究.pdf

1、目的:心房纖顫是一種常見的臨床病理表現(xiàn),有逐年增高趨勢,持續(xù)的心房纖顫以心房不規(guī)則的節(jié)律和高速的頻率導(dǎo)致心動過速心肌病、相關(guān)血流動力學(xué)紊亂和血栓事件等構(gòu)成高死亡、高致殘和高額的治療費(fèi)用的結(jié)局。是21世紀(jì)心血管醫(yī)師面臨的挑戰(zhàn)之一,也是心血管病中迄今從發(fā)病機(jī)理到治療方法均存在很大爭議的一個研究領(lǐng)域。該領(lǐng)域研究從心肌自身變化的觀察逐漸轉(zhuǎn)移到對心肌間組織結(jié)構(gòu)的重構(gòu),現(xiàn)有研究結(jié)果顯示了心房纖顫與心房組織纖維化和縫隙連接蛋白的形態(tài)、數(shù)量以及分布變化

2、明顯相關(guān)。這些組織重構(gòu)的發(fā)生起源迄今尚不清楚,是否有某種細(xì)胞的參與也不清楚。由于心房纖顫意味著心肌電活動功能的存在,所以本研究旨在探討心肌細(xì)胞間組織和細(xì)胞的變化特征:①房顫患者與竇性心律患者間心房肌膠原蛋白特點(diǎn)、閏盤分布以及連接蛋白Cx43的差異;②分析纖維化與閏盤及連接蛋白之間是否存在因果關(guān)系,進(jìn)而闡明纖維化、閏盤和連接蛋白重構(gòu)在房顫發(fā)病機(jī)制中所發(fā)揮的作用。為預(yù)防和有效而經(jīng)濟(jì)地治療心房纖顫,提供相關(guān)的基礎(chǔ)理論依據(jù);③尋找和觀察是否有心

3、肌以外的細(xì)胞參入心房纖維化的過程。
　　方法:在本院心血管病研究所的同意下,按照赫爾辛基宣言的要求,取行心臟手術(shù)的臨床診斷為持續(xù)性房顫(AF)26例,竇性心律(SR)18例,男∕女=24∕20,平均年齡為40±12歲,心功能為Ⅱ~Ⅲ級(NYHA分級),排除合并缺血性心臟病、高血壓、糖尿病或嚴(yán)重肝腎功能不全的患者。體外循環(huán)前取患者左、右心耳標(biāo)本(1cm×1cm×2cm大小),除去血液和脂肪組織后迅速切取一小塊(3mm×3mm×5mm

4、大小),在4℃磷酸緩沖液配制的2％戊二醛固定液中固定,環(huán)氧樹脂包埋,電鏡超薄切片(厚度700-800A)后用飽和醋酸鈾、枸櫞酸鉛雙染。置于銅網(wǎng)上以備觀察。剩余的組織投入10%福爾馬林中固定適當(dāng)時間,常規(guī)石蠟包埋切片(厚度為0.5μm)。(1)進(jìn)行HE染色,大體觀察房顫組與竇律組心肌纖維以及細(xì)胞核,細(xì)胞外基質(zhì)的差異。(2)行天狼猩紅染色,偏光顯微鏡下觀察AF組與SR組心房?、裥湍z原并通過圖像分析系統(tǒng)分析統(tǒng)計兩組間Ⅰ型膠原含量分?jǐn)?shù)(coll

5、agen volume fraction of collagenΙ,CVF-Ⅰ)的差異;(3)超微病理切片,透射電鏡下觀察閏盤并統(tǒng)計閏盤組數(shù)及閏盤重構(gòu)分?jǐn)?shù)(remodeled intercalated disc fraction,RIDF);(4)連接蛋白43(connexin,Cx43)免疫組化染色,普通顯微鏡下觀察分析縫隙連接蛋白Cx43的含量分?jǐn)?shù)(volume fraction of connexin43,Cx43VF),統(tǒng)計兩組

6、間的差異;(5)CVF-I、Cx43VF和RIDF三者之間分別進(jìn)行pearson相關(guān)分析;(6)透射電鏡下觀察成纖維細(xì)胞出現(xiàn)的幾率以及行為特征。
　　結(jié)果:(1)AF組CVF-I高于SR組(1.26 vs.0.57,t=4.82,p<0.01);(2)兩組間閏盤組數(shù)無顯著差異(9.54 vs.10.11,t=-0.66,p=0.52), AF組閏盤重構(gòu)分?jǐn)?shù)大于SR組(39.48 vs.15.61,t=5.04,p<0.01);(3

7、)AF組Cx43VF低于SR組(3.45 vs.5.22,t=-4.62,p<0.01);(4)CVF-I與閏盤重構(gòu)比例正相關(guān)(r=0.96,p<0.01);(5)CVF-I與Cx43VF負(fù)相關(guān)(r=-0.98,p<0.01);(6)RIDF與Cx43VF之間成負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.95,p<0.01)(7)成纖維細(xì)胞幾率房顫組明顯高于竇律組(4.31&1.89,p<0.01);(8)成纖維細(xì)胞增生活化、游走分離心肌,推移閏盤,縫隙連接

8、破壞。
　　結(jié)論:成纖維細(xì)胞參與房顫患者心肌間組織的炎癥修復(fù),被活化后的成纖維細(xì)胞在修復(fù)過程中受趨化因子的調(diào)節(jié),在游走和釋放膠原纖維的過程中,起到分離或分割心肌,推移閏盤的作用,從而屏蔽了心肌細(xì)胞間的密切聯(lián)系,使閏盤發(fā)生遷徙而分布不均,機(jī)械性解偶聯(lián)和縫隙連接結(jié)構(gòu)的毀損、蛋白的破壞。由于膠原纖維的高生物阻抗性和側(cè)側(cè)閏盤中縫隙連接蛋白的電傳遞功能的破壞,可能是心房纖顫形成的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。從本質(zhì)上說,心房纖顫如其說是炎癥的表現(xiàn),倒不如說是心