咯利普蘭對佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠肺組織核因子κB的影響.pdf

1、目的:觀察核因子κB(Nuclear factor kappa B，NF-κB)在佐劑關(guān)節(jié)炎(Adjuvant arthritis，AA)大鼠肺組織中的表達(dá)及咯利普蘭對其的影響，探討磷酸二酯酶(Phosphodiesterase，PDE)在類風(fēng)濕肺發(fā)病機(jī)制中的作用，為PDE抑制劑治療類風(fēng)濕肺奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法:選清潔級健康、雄性Wistar大鼠，共54只，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，體重160g-180g適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后

2、，隨機(jī)分為:(1)A組（模型組）18只，于造模第1天右后足足跖部皮內(nèi)無菌注射完全弗氏佐劑（Complete Freund's Adjuvant，CFA）（含卡介苗7.5mg/ml）0.1ml，同時(shí)給予生理鹽水(0.5ml/d)腹腔注射(2)B組（咯利普蘭組）18只，于造模第1天右后足足跖部皮內(nèi)無菌注射CFA（含卡介苗7.5mg/ml）0.1ml，同時(shí)給予咯利普蘭溶液(用0.9％生理鹽水配制成濃度為0.1 mg/ml，0.5ml/d左右，

3、含咯利普蘭0.25mg/kg)腹腔注射。(3)C組（對照組）18只，造模第1天右后足足跖部皮內(nèi)無菌注射生理鹽水0.1ml，同時(shí)給予生理鹽水腹腔注射(0.5ml/d)。各組大鼠分別于造模第0天，7天，14天，28天用足趾容積測量儀測量左右后足體積，比較各組關(guān)節(jié)腫脹率;并于造模第7天、14天、28天放血處死大鼠，取其左肺上葉和右肺下葉，4％多聚甲醛溶液進(jìn)行固定，觀察大鼠關(guān)節(jié)體積變化情況，蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin，HE

4、)染色及Masson染色，觀察各組大鼠肺組織的肺泡炎及纖維化程度，免疫組化檢測肺組織中NF-κB的表達(dá)。用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:
　　1.大鼠一般情況造模第1天各組大鼠造模足均出現(xiàn)輕度紅腫，腫脹度(％)分別為C組7.46±1.27，A組8.41±1.02，B組8.07±1.56（P＞0田.05）。7、14、28天時(shí)A組造模足腫脹度(％)分別為31.54±3.26、49.66±4.03、32.

5、78±3.26，B組分別為24.74±2.27、35.54±2.09、23.87±2.76，C組分別為9.98±1.64、11.16±2.01、11.57±1.09，各時(shí)間點(diǎn)腫脹度A組較C組相比增加率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。B組較C組腫脹程度增加(P＜0.05)，7、14、28天B組較A組腫脹度降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。對側(cè)足于造模12天時(shí)出現(xiàn)紅腫，A組14、28天時(shí)腫脹程度(％)分別為25.29±3.72、3

6、8.86±3.72，B組分別為17.74±1.77、24.51±3.84，C組(％)分別為10.99±1.38、11.76±1.31，A組較C組增加(P＜0.05)，B組較C組腫脹程度增加(P＜0.05)，14、28天B組較A組腫脹度降低(P＜0.05)。
　　2.肺組織學(xué)病理學(xué)結(jié)果HE染色:A組肺組織7天時(shí)，可見肺泡間隔增厚、水腫，中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤，局部可見紅細(xì)胞，偶有肺泡腔破壞，14天時(shí)肺泡間隔增厚較

7、7天時(shí)明顯，間質(zhì)內(nèi)淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤明顯，可見成纖維細(xì)胞增生，肺泡腔破壞、融合，部分呈實(shí)變改變，28天時(shí)可見肺泡間隔增厚，肺泡破壞、融合明顯，少量炎性細(xì)胞浸潤，7、14、28天肺泡炎評分分別為2.8±0.837、3.67±0.516、2.17±0.753，C組肺泡炎評分各時(shí)間段均為1.0±0.0、1.17±0.408、1.0±0.0，A組較C組增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，對照組7、14、28天均未見明顯肺泡間隔增厚及炎性細(xì)

8、胞浸潤，B組肺組織各時(shí)間段表現(xiàn)介于A組與C組之間，7、14天肺泡炎評分分別為1.83±0.753、2.5±0.548，較C組升高(P＜0.05)，較A組降低(P＜0.05)。
　　肺泡Masson染色:A組7天時(shí)可見少量綠色膠原，14天綠色膠原增多，肺泡間隔、肺泡腔內(nèi)均可見纖維蛋白增多，28天時(shí)病變范圍擴(kuò)大，大量膠原纖維增生、沉積。C組7、14、28天時(shí)均可見少量綠色基質(zhì)膠原，分布于大氣道和血管壁周圍，B組表現(xiàn)介于對照組與模型組之

9、間。纖維化評分7天時(shí)A組、B組、C組分別為1.2±0.447、1.0±0.0、1.17±0.408，均無明顯差別(P＞0.05)，14天、28天時(shí)A組的纖維化評分分別為2.5±0.548、3.33±0.817，C組分別為1.0±0.0、1.17±0.408，A組均顯著高于C組(P＜0.05)，B組14天、28天時(shí)纖維化評分分別為2±0.632、1.8±0.837，均較C組升高(P＜0.05)，28天時(shí)纖維化程度較A組減輕(P＜0.05)

10、。
　　3.肺組織NF-κB的表達(dá)A組肺組織中NF-κB表達(dá)增多，7天時(shí)表達(dá)強(qiáng)度最高，IOD值為170657.84±2422.13，肺泡上皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞均可見胞漿和細(xì)胞核內(nèi)黃色或棕黃色顆粒，以細(xì)胞核染色為主，14天、28天時(shí)NF-κB表達(dá)強(qiáng)度較前有所下降，IOD值分別為123337.58±2590.75、74002.79±3731.36，C組7、14、28天IOD值分別為18285.34±1168.74、17

11、704.03±888.01、17425.58±648.09，A組均高于C組并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。C組肺組織7、14、28天均可見少量NF-κB在肺泡上皮細(xì)胞及支氣管上皮細(xì)胞中表達(dá)，以胞漿為主，B組肺組織中NF-κB表達(dá)強(qiáng)度介于兩者之間，7、14、28天IOD值分別為79452.24±2566.52、47241.56±2105.12、26183.67±1616.49，較A組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，較C組表達(dá)