IRE1-CHOP信號通路在驚厥持續(xù)狀態(tài)幼年大鼠海馬中的作用及依達(dá)拉奉對其的影響.pdf

1、目的：觀察驚厥持續(xù)狀態(tài)（SC）幼年大鼠海馬IREI（the inositol requiring enzyme1）、前凋亡因子（CHOP/GADD153）及TUNEL陽性細(xì)胞表達(dá)的變化，探討其相關(guān)性：并觀察依達(dá)拉奉預(yù)處理后二者的變化。 方法：雄性SD幼年大鼠138只，分為正常對照組（NC組）、驚厥持續(xù)狀態(tài)組（SC組）、依達(dá)拉奉預(yù)處理組（EDA組）三大組；其中SC組、EDA組又均隨機(jī)分為5組，分別于驚厥后4h、12h、24h、48

2、h和72h處死。采用氯化鋰-匹魯卡品法制作驚厥持續(xù)狀態(tài)模型：幼年大鼠按127mg/kg劑量腹腔注射氯化鋰，18h后按1mg/kg劑量腹腔注射溴甲東莨菪堿，30min后按100mg/kg劑量腹腔注射匹魯卡品；觀察大鼠行為學(xué)變化，記錄各組大鼠的驚厥率、驚厥潛伏期、驚厥程度分級、驚止時間及死亡情況。選擇驚厥發(fā)作達(dá)Ⅳ～Ⅴ級，且終止驚厥發(fā)作后狀態(tài)良好的大鼠為合格SC大鼠模型。EDA組在大鼠造模前三天予EDA3mg/kg腹腔注射，每天注射一次，連續(xù)

3、3天。大鼠于驚厥后各時間點處死；光鏡、電鏡和TUNEL法檢測觀察大鼠海馬病理學(xué)改變及細(xì)胞凋亡情況；免疫組化法檢測海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)CHOP/GADD153蛋白表達(dá)動態(tài)變化；RT-PCR技術(shù)檢測海馬IRE1、CHOP/GADD153mRNA表達(dá)的動態(tài)變化。 結(jié)果： 1.驚厥持續(xù)狀態(tài)模型的建立：注射匹魯卡品后，有10只（10/130）大鼠未成功誘發(fā)驚厥，27只（27/130）出現(xiàn)Ⅳ發(fā)作，其余大鼠93（93/130）均誘導(dǎo)

4、出Ⅴ級驚厥發(fā)作。造模過程中死亡大鼠9只，其中2只（2/130）于驚厥后12h死亡；1只（1/130）于驚厥后24h死亡；3只（3/130）于48h死亡；2只（2/130）死于驚厥后72h；其死亡高峰位于驚厥后48h，總死亡率為6.52%。 2.HE染色：NC組大鼠海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)及顳葉皮層錐體細(xì)胞層次清晰，排列整齊，神經(jīng)元輪廓清晰，胞核大而圓。SC組大鼠出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)元變性及丟失，以海馬CA1、CA3區(qū)最顯著，驚厥后4

5、h少量神經(jīng)元腫脹；12h排列欠整齊，受累數(shù)增加：24h胞漿胞核空泡化；48h細(xì)胞不規(guī)則，見紅色神經(jīng)元及空穴；72h有減輕。EDA組各時間點總體比SC組減輕。 3.電鏡：NC組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)清晰，胞膜及核膜完整光滑，核染色質(zhì)分布均勻，胞漿內(nèi)線粒體，高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）等細(xì)胞器豐富。SC組表現(xiàn)為：驚厥后4h神經(jīng)元毛細(xì)血管周圍水腫，12h部分ER輕度擴(kuò)張，個別線粒體輕度腫脹；24h細(xì)胞間隙擴(kuò)張，部分ER和線粒體擴(kuò)張；4

6、8h以后ER擴(kuò)張較前有所減輕，線粒體腫脹有加重。EDA組各時間點改變均較SC組減輕。 4.TUNEL法檢測神經(jīng)元凋亡結(jié)果：SC組海馬CA1、CA3區(qū)TUNEL陽性細(xì)胞表達(dá)均于驚厥后4h少量增加，48h達(dá)高峰，之后下降；但均明顯高于NC組（P<0.05或P<0.01）。EDA組12h-72h時間點TUNEL陽性細(xì)胞較SC組明顯降低（P<0.05）；但仍高于NC組（P<0.01）。 5.免疫組化檢測結(jié)果：CHOP/GADD1

7、53蛋白免疫組化檢測結(jié)果：正常海馬CA1、CA3區(qū)CHOP/GADDD153蛋白少量表達(dá)，SC后4h表達(dá)開始增加，24h達(dá)高峰，72h明顯下降。EDA組各時間點CHOP/GADDD153蛋白表達(dá)較SC組明顯降低（P<0.05）；但仍高于NC組（P<0.01）。 6.RT-PCR檢測結(jié)果： （1）IRE1mRNA表達(dá)結(jié)果：SC組海馬IRE1 mRNA表達(dá)于驚厥后即迅速上升，4h為高點，之后緩慢下降；4h，12h均高于NC組

8、（P<0.01）。EDA組4h、12h和24b時間點海馬IRE1 mRNA表達(dá)均較SC組和NS組明顯升高（P<0.01）。 （2）CHOP/GADD153 mRNA表達(dá)結(jié)果：生理狀態(tài)下，海馬CHOP/GADDD153 mRNA少量表達(dá)；SC后4h表達(dá)迅速增加，12h達(dá)高峰，24h開始下降；明顯高于NC組（P<0.05或P<0.01）。EDA組4h，12h，48h時間點海馬CHOP/GADDD153 mRNA表達(dá)較SC組相應(yīng)時間點

9、明顯降低（P<0.05或P<0.01）；但仍高于NC組（P<0.01）。 7.相關(guān)性分析：大鼠海馬IRE1 mRNA與CHOP/GADD153 mRNA驚厥后早期（4h，12h）呈負(fù)相關(guān)（γ=0.472，P<0.01）。海馬CA1區(qū)TUNEL陽性細(xì)胞與CA1區(qū)CHOP/GADD153蛋白、CHOP/GADD153 mRNA呈正相關(guān)（γ=0.691，0.585，P<0.01）。海馬CA3區(qū)TUNEL陽性細(xì)胞與CA3區(qū)CHOP/GA

10、DD153蛋白、CHOP/GADD153 mRNA呈正相關(guān)（γ=0.602，0.339，P<0.01）。 結(jié)論： 1.SC后幼年大鼠海馬存在不同程度的神經(jīng)元丟失、凋亡，提示SC可致海馬不同程度損傷。 2.SC后早期幼年大鼠海馬IRE1mRNA與CHOP/GADD153 mRNA及蛋白表達(dá)均增高，提示SC后幼年大鼠海馬內(nèi)可能發(fā)生ERS，且IREI/CHOP信號通路可能被激活。 3.EDA預(yù)處理可以影響IRE