BCL11A在髓系白血病中的臨床研究和致病機(jī)制的初步探討.pdf

1、[研究目的]髓系白血病是一種高異質(zhì)性惡性血液病，具有復(fù)雜的遺傳學(xué)，形態(tài)學(xué)以及免疫表型特征。白血病的發(fā)病機(jī)理大都可歸于遺傳異常，例如染色體易位，DNA突變，基因表達(dá)異常等?，F(xiàn)今為適應(yīng)日益復(fù)雜的疾病診斷和預(yù)后要求，新的分子標(biāo)記是非常需要的。治療方法也能通過識別新的分子標(biāo)記得到進(jìn)一步的發(fā)展以實(shí)現(xiàn)顯著療效。B細(xì)胞白血病11A基因(BCL11A)最初發(fā)現(xiàn)于包含免疫球蛋白重鏈基因座的染色體易位，該基因座發(fā)現(xiàn)于人類B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤，并可通過逆轉(zhuǎn)錄

2、病毒插入到鼠白血病。該基因編碼一個Kruppel樣鋅指蛋白，該蛋白含有3個C2H2鋅指結(jié)構(gòu)，一個富脯氨酸區(qū)域，和一個酸性結(jié)構(gòu)域。BCL11A主要作為一個轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子通過直接與一個富鳥嘌呤胞嘧啶(GC)區(qū)結(jié)合的DNA基序起作用。BCL11A主要在腦，造血細(xì)胞，免疫系統(tǒng)和睪丸表達(dá)，在發(fā)育過程中扮演重要角色。BCL11A異常與惡性腫瘤有關(guān)聯(lián)。鑒于BCL11A對血紅蛋白的表達(dá)調(diào)控的顯著升值，近來對BCL11A的研究吸引了越來越多的關(guān)注。包括我們

3、工作在內(nèi)的已有研究已經(jīng)將BCL11A異常與多種惡性血液病相聯(lián)系。然而BCL11A在白血病的表達(dá)尚未被研究。我們希望借助QPCR絕對定量技術(shù)研究BCL11A在髓系白血病中的表達(dá)規(guī)律，為髓系白血病診斷和預(yù)后預(yù)測提供新的生物標(biāo)記物。
　　[研究方法]收集292例急性髓系白血病(AML)和73例慢性髓系白血病(CML)患者骨髓，并以Ficoll法分離白血病細(xì)胞，而后提取它們的mRNA，并經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲取cDNA。再以Taqman實(shí)時定量PCR

4、技術(shù)檢測BCL11A表達(dá)水平。結(jié)合樣本的亞型，年齡，性別等信息進(jìn)行分析，歸納BCL11A表達(dá)水平與各種因素間的關(guān)系;以直接測序法檢測檢測這些樣本中幾種白血病常見的基因突變，分析這些基因突變與BCL11A異常表達(dá)之間的相關(guān)性;比較高表達(dá)BCL11A病人與低表達(dá)病人的預(yù)后情況，分析高表達(dá)BCL11A對預(yù)后的影響;采用構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)BCL11A細(xì)胞系的方法，比較這些細(xì)胞系在BCL11A表達(dá)水平升高前后的生存能力，抗凋亡能力以及骨髓分化能力的差別，以

5、探索BCL11A影響髓系白血病預(yù)后的細(xì)胞學(xué)致病機(jī)制;建立AML小鼠模型以進(jìn)一步研究BCL11A對白血病病程發(fā)展的作用原理。
　　[研究結(jié)果]1）BCL11A在急性髓系白血病和慢性髓系白血病中均出現(xiàn)普遍高表達(dá);2）在急性髓系白血病中，M0 BCL11A高表達(dá)比例最高(80％)，M3比例最小(27.9％)。BCL11A高表達(dá)與年齡，白細(xì)胞數(shù)和中間細(xì)胞遺傳學(xué)的風(fēng)險呈正相關(guān);3）在急性髓系白血病中，H-BCL11A與FLT3-ITD和DN

6、MT3A-R882突變正相關(guān)，與EVI1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與NRAS突變無關(guān);4）BCL11A的表達(dá)水平會隨著CML病程的發(fā)展，隨著從慢性期到急變期而升高;5）BCL11A表達(dá)水平可以作為獨(dú)立的AML病人的預(yù)后風(fēng)險因子;6）BCL11A異常表達(dá)提高了白血病細(xì)胞系細(xì)胞的存活率并阻礙了骨髓分化;7）BXH2小鼠髓系白血病細(xì)胞系(B114，B140，B117)經(jīng)尾靜脈注射移植入BXH(F1)小鼠體內(nèi)可以構(gòu)建AML小鼠模型，為進(jìn)一步研究BCL11A

7、對白血病病程發(fā)展的作用原理奠定基礎(chǔ)。
　　[結(jié)論]我們發(fā)現(xiàn)并第一次提出BCL11A在人類髓系白血病發(fā)生發(fā)展過程中的重要性。BCL11A作為一個癌基因，有可能在白血病中具有復(fù)雜的分子間相互作用。并證實(shí)BCL11A高表達(dá)是較差預(yù)后的獨(dú)立風(fēng)險因子，尤其是對于中間細(xì)胞遺傳學(xué)風(fēng)險患者。因此我們建議在診斷和檢測AML\CML病人時使用QPCR技術(shù)定量他們的BCL11A表達(dá)水平。我們的工作從臨床角度加深了對BCL11A生物學(xué)的理解，并將BCL1