雌激素調(diào)控骨代謝的分子機(jī)理及長期低劑量HRT對絕經(jīng)后婦女的腦保護(hù)作用.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)主要觀察了雌激素長時(shí)程作用后的促成骨作用和抗成骨細(xì)胞的凋亡作用及上述過程中MAPK信號通路的改變。此外，從AD易感基因型的角度，探討了長期低劑量HRT對絕經(jīng)后婦女的腦保護(hù)作用。 一、雌激素調(diào)控骨代謝過程的分子機(jī)理。 1.雌激素長時(shí)程作用對人的類成骨細(xì)胞TE85成骨作用的影響及其分子機(jī)制。 1.1 E2(0.1，1.0，10nmol/L)作用于TE85細(xì)胞14天，三個(gè)劑量都能劑量依賴性地增加細(xì)胞增殖活力，ER

2、s特異性拮抗劑ICI(0.1nmol/L)與E2(0.1nmol/L)合用，則細(xì)胞增殖活力無明顯改變，合用后ICI能明顯降低由于E2作用導(dǎo)致的細(xì)胞增殖活力的升高。說明E2能夠促進(jìn)TE85細(xì)胞增殖活力，而此作用是通過雌激素受體介導(dǎo)的。 1.2 E2(0.1，1.0，10nmol/L)作用于TE85細(xì)胞14天，三個(gè)劑量都能劑量依賴性地增加細(xì)胞3H.胸腺嘧啶摻入量，ICI(0.1nmol/L)與2(0.1mol/L)合用，則細(xì)胞<'3

3、>H-胸腺嘧啶摻入量無明顯改變，合用后ICI能明顯降低由于E2作用導(dǎo)致的細(xì)胞<'3>H-胸腺嘧啶摻入量升高。說明E2通過受體途徑促進(jìn)TE85細(xì)胞DNA合成增加，進(jìn)而促進(jìn)TE85細(xì)胞增殖。 1.3 E2(0.1，1.0，10nmol/L)作用于TE85細(xì)胞14天，三個(gè)劑量都能劑量依賴性地增加細(xì)胞鈣攝取，ICI(0.1nmol/L)與E2(0.1nmol/L)合用，則細(xì)胞鈣攝取量無明顯改變，合用后ICI能明顯降低由于E2作用導(dǎo)致的細(xì)

4、胞鈣攝取量升高。說明E2通過受體途徑促進(jìn)TE85細(xì)胞攝取細(xì)胞外鈣，有利于細(xì)胞間質(zhì)發(fā)生礦化。 1.4 E2(1nmol/L)長時(shí)程作用14天后，細(xì)胞間質(zhì)礦化面積明顯增大，但I(xiàn)CI(1nmol/L)與E2(1nmol/L)合用后，礦化面積明顯減小。說明E2促進(jìn)TE85細(xì)胞分泌間質(zhì)礦化的機(jī)理并不完全是通過受體途徑介導(dǎo)的。 1.5在E2(1.0nmol/L)作用于TE85細(xì)胞24小時(shí)后，p-ERK1/2的表達(dá)達(dá)到42％，而此后持

5、續(xù)作用的6天和12天其表達(dá)量維持在20％左右。對照組的p-ERK1/2在6小時(shí)和12天的表達(dá)量則接近為零。說明E2通過使MAPK信號通路中的ERK發(fā)生磷酸化，激活了導(dǎo)致細(xì)胞增殖的信號通路，從而促進(jìn)TE85細(xì)胞的增殖。 2.17-β雌二醇對脂多糖誘導(dǎo)的大鼠原代成骨細(xì)胞凋亡的影響。 2.1 LPS(10μg/ml)作用于原代成骨細(xì)胞72小時(shí)后能顯著性的誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡；而在LPS誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的同時(shí)加入E2(0.1，1.0，1

6、0nmol/L)作用72小時(shí)后，能顯著的抑止LPS誘導(dǎo)的這種細(xì)胞的凋亡，三個(gè)劑量組都能劑量依賴性地降低細(xì)胞凋亡率；ICI(0.1nmol/L)與E2(0.1nmol/L)合用，細(xì)胞凋亡率與單用E2(0.1nmol/L)組相比無明顯差異。說明E2能夠保護(hù)成骨細(xì)胞不被LPS誘導(dǎo)出現(xiàn)凋亡，而其作用并不是通過雌激素受體途徑來實(shí)現(xiàn)的。 2.2 LPS能夠?qū)е麓笫笤晒羌?xì)胞發(fā)生明顯的凋亡，特別是誘導(dǎo)成骨細(xì)胞細(xì)胞出現(xiàn)早期凋亡增加明顯；E2則

7、能顯著的抑制LPS誘導(dǎo)的早期細(xì)胞的凋亡，而對于晚期凋亡和死亡細(xì)胞則沒有明顯影響。說明E2能夠保護(hù)成骨細(xì)胞在LPS誘導(dǎo)下不發(fā)生早期凋亡。 2.3 LPS持續(xù)作用會導(dǎo)致原代成骨細(xì)胞的Caspase-3、P38、JNK磷酸化表達(dá)與升高，E2則能使得這種磷酸化的Caspase-3、P38、JNK表達(dá)明顯減少，而ICI則能部分遏制E2減少磷酸化Caspase-3、P38、JNK表達(dá)的作用。說明LPS是通過Caspase-3、P38、JNK

8、磷酸化途徑誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，而E2抑制這些信號分子表達(dá)的作用部分是由ER介導(dǎo)的。 二、長期低劑量HRT對絕經(jīng)后婦女腦海馬的影響。 1.在各個(gè)年齡段，HRT。組血漿雌二醇水平比對照組都有顯著的升高(P<0.05)。而血漿中孕酮和睪酮水平在各個(gè)年齡段無顯著差異。說明HRT使血漿雌二醇水平維持在生理濃度(>20 pg/ml)。而對照組血漿雌二醇水平則在各個(gè)年齡段皆低于牛理最低血漿雌二醇濃度20 pg/ml。 2.HRT

9、、組外周血小板膜上的PBR水平在各年齡段均高于對照組。同時(shí)還觀察到受試者血中PBR水平與E<,2>水平呈明顯相關(guān)性。說明雌激素水平接近于正常生理濃度時(shí)，將減輕內(nèi)分泌失衡導(dǎo)致的慢性應(yīng)激過程。 3.HRT組共檢測出三種apoE等位基因型：ε3/ε3：61例，ε3/ε4：15例，ε2/ε3：7例；對照組共檢測出五種apoE等位基因型：ε3/e3：71例，ε3/ε4：14例，ε2/ε3：12例ε2/ε4：1例，ε4/ε4：1例。HRT和

10、對照組之間apoE基因型都是以e3/e3型為主，且基因型分布無明顯差異，HRT和對照組之間apoE等位基因分布無明顯差異。另外，HRT組的ERα等位基因型分布為：ppxx：30例，ppXx：6例，PPxx：2例，PPXx：4例，PPXX：3例，Ppxx：20例，PpXx：17例。PpXX：1例；對照組ERα的等位基因型分布為：ppxx：35例，ppXx：1例，PPxx：6例，PPXx：5例，PPXX：4例，Ppxx：27例，PpXx：1

11、7例，PpXX：3例。HRT和對照組之間ERa基因型分布無明顯差異，HRT和對照組之間ERα等位基因分布也無明顯差異。 4.在相同.AD易感apoE(ε3/ε4)基因型條件下，HRT組受試者海馬體積占全腦容積的百分比明顯高于對照組(P<0.05)。而在相同的AD易感ERα基因型條件下，HRT、組受試者海馬體積占全腦容積的百分比只是略高于對照組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。說明長期低劑量HRT、可以保護(hù)AD危險(xiǎn)因子持有者腦海馬組織，減緩其