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文檔簡介
1、本研究目的:端粒酶抑制劑ASODN、SODN和EGCG分別作用肝癌細(xì)胞株SMMC-7721和鼻咽癌細(xì)胞株CNE2后,運用熒光定量PCR檢測基因表達(dá)譜芯片篩選出的六種基因的轉(zhuǎn)錄水平,探討調(diào)節(jié)端粒酶活性的共同分子靶點。 方法:1、在前期研究中利用基因表達(dá)譜芯片檢測端粒酶抑制劑作用于兩種癌細(xì)胞株后基因表達(dá)譜的變化,從基因表達(dá)譜芯片已篩選出的抑制劑作用前后共同變化的差異基因中,選擇出6種上調(diào)或下調(diào)顯著的基因,合成引物。2、培養(yǎng)SMMC-
2、772l和CNE2至對數(shù)生長期,以EGCG、ASODN和SODN的最佳濃度作用于細(xì)胞作為處理組,同時以不加藥物的細(xì)胞作為對照組,同時提取兩組細(xì)胞RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。3運用熒光定量PCR測定6種待測基因的轉(zhuǎn)錄水平,即mRNA的相對含量,結(jié)果與芯片所篩選出的基因表達(dá)譜的變化水平進(jìn)行比較。 結(jié)果:1、EGCG、ASODN和SODN三種端粒酶抑制劑作用SMMC-7721后待測基因轉(zhuǎn)錄水平的變化,及其與基因表達(dá)譜變化的比較
3、: 1.1 三種藥物作用后KLHL24和BTG1基因的轉(zhuǎn)錄水平相對略低于對照組,這與其基因表達(dá)譜顯著上調(diào)的結(jié)果相反。 1.2 EGCG、SODN作用后DIO2和ID3基因的轉(zhuǎn)錄水平相對略低于對照組,這與其基因表達(dá)譜表達(dá)顯著下調(diào)結(jié)果相似;而ASODN作用后DIO2和ID3基因的轉(zhuǎn)錄水平相對略高于對照組的,這與其基因表達(dá)譜顯著下調(diào)相反。 2、EGCG、ASODN和SODN三種端粒酶抑制劑作用CNE2后待測基因轉(zhuǎn)錄水
4、平與基因表達(dá)譜變化比較: 2.1 三種藥物作用后KRT34基因的轉(zhuǎn)錄水平顯著高于對照組,這與其基因表達(dá)譜顯著上調(diào)結(jié)果相似。 2.2三種藥物作用后CA5B基因的轉(zhuǎn)錄水平顯著低于對照組,這與基因表達(dá)譜顯著下調(diào)結(jié)果相似。 結(jié)論:1 EGCG、ASODN和SODN三種端粒酶抑制劑作用SMMC-7721,熒光定量PCR檢測KLHL24、BTG1、DIO2和ID3基因轉(zhuǎn)錄水平的變化,沒有發(fā)現(xiàn)其共同上調(diào)或共同下調(diào)的一致變化;
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