超早期針刺對急性腦缺血大鼠能量代謝的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 研究在前期采用microPET觀察到超早期針刺對腦缺血葡萄糖代謝改善的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討超早期針刺抗腦缺血損傷的作用機(jī)理，為臨床針刺治療缺血性中風(fēng)提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 SPF級雌性SD大鼠140只，3月齡，體重200～250g，隨機(jī)分為7組，正常組、穴位2h組、非穴位2h組、模型2h組、穴位24h組、非穴位24h組、模型24h組，每組各20只，其中10只用來灌注取腦，10只取新鮮

2、腦組織。采用開顱法電凝大腦中動脈造模，制作右側(cè)大鼠大腦中動脈急性腦缺血模型。穴位組取“百會”、“水溝”針刺，以120次/分左右進(jìn)行捻轉(zhuǎn)1min，共留針30min，期間每5min捻轉(zhuǎn)行針1次，每次1min。非穴位組分別在百會、水溝左側(cè)旁開約5mm處進(jìn)針，避開穴位，手法同穴位針刺。穴位24h組及非穴位24h組在造模后24小時候再針刺1次。采用高效液相檢測各組缺血腦組織ATP、ADP、AMP含量，比色法檢測Na+-K+-ATP酶、Ca2+-A

3、TP酶含量，real-time PCR檢測HIF-1αmRNA及EPOmRNA表達(dá)，采用免疫組化檢測缺血腦組織GLUT1、GLUT3陽性細(xì)胞表達(dá)，對上述結(jié)果進(jìn)行綜合統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.腦組織ATP、ADP含量在大鼠腦缺血后2h后即明顯下降，與正常組比較，有顯著性差異；模型24h組ATP、ADP含量降低更顯著，與模型2h組比較，有顯著性差異。穴位2h組大鼠ATP、ADP含量較模型2h組升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有

4、顯著性差異；與非穴位2h組比較，有顯著性差異。非穴位2h組與模型2h組比較，無顯著性差異。穴位24h組ATP、ADP含量較模型24h組及非穴位24h組明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異，但非穴位24h組與模型24h組比較，無顯著性差異。腦組織AMP含量在大鼠腦缺血后2h后即明顯升高，與正常組比較，有顯著性差異；模型24h組AMP含量升高更顯著，與模型2h組比較，有顯著性差異。穴位2h組大鼠AMP含量較模型2h組降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯

5、著性差異，與非穴位2h組比較，有顯著性差異。非穴位2h組與模型2h組比較，無顯著性差異。穴位24h組AMP含量顯著低于較模型24h組及非穴位24h組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異，但非穴位24h組與模型24h組比較，無顯著性差異。
　　 2.腦組織TAN在大鼠腦缺血后2h后即明顯下降，與正常組比較，有顯著性差異；模型24h組TAN降低更顯著，與模型2h組比較，有顯著性差異。穴位2h組大鼠TAN較模型2h組升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著

6、性差異，與非穴位2h組比較，有顯著性差異。非穴位2h組與模型2h組比較，無顯著性差異。穴位24h組TAN較模型24h組明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異；穴位24h組TAN較非穴位24h組升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異。但非穴位24h組與模型24h組比較，無顯著性差異。
　　 3.腦組織EC在大鼠腦缺血后2h后即明顯下降，與正常組比較，有顯著性差異(P＜0.01)；模型24h組EC降低更顯著，與模型2h組比較，有顯著性差異(

7、P＜0.01)。穴位2h組大鼠EC較模型2h組升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異(P＜0.01)；與非穴位2h組比較，有顯著性差異(P＜0.01)。非穴位2h組與模型2h組比較，無顯著性差異(P＞0.05)。穴位24h組EC較模型24h組及非穴位24h組明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異(P＜0.01)；但非穴位24h組與模型24h組比較，無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 4.腦組織Na+-K+-ATP酶含量在大鼠腦缺血后2

8、h后即明顯下降，與正常組比較，有顯著性差異(P＜0.01)；模型24h組Na+-K+-ATP酶降低更顯著，與模型2h組比較，有顯著性差異(P＜0.01)。穴位2h組及非穴位2h組大鼠Na+-K+-ATP酶含量較模型2h組升高，但穴位2h組上升更顯著，與模型2h組比較，有顯著性差異(P＜0.01)，與非穴位2h組比較，有顯著性差異(P＜0.05)。非穴位2h組與模型2h組比較，有顯著性差異(P＜0.05)。穴位24h組Na+-K+-ATP

9、酶含量較模型24h組及非穴位24h組明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異(P＜0.01)；非穴位24h組與模型24h組比較，無顯著性差異。
　　 5.腦組織Ca2+-ATP酶含量在大鼠腦缺血后2h后即明顯下降，與正常組比較，有顯著性差異(P＜0.01)；模型24h組降低更顯著，與模型2h組比較，有顯著性差異(P＜0.01)。穴位2h組大鼠Ca2+-ATP酶含量較模型2h組升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異(P＜0.01)，與非穴位

10、2h組比較，有顯著性差異(P＜0.01)。非穴位2h組與模型2h組比較，無顯著性差異(P＞0.05)。穴位24h組Ca2+-ATP酶含量較模型24h組及非穴位24h組明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異(P＜0.01)；非穴位24h組與模型24h組比較，無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 6.各組大鼠缺血側(cè)皮質(zhì)區(qū)域GLUT1免疫陽性物MOD值明顯高于正常組(P＜0.05～0.01)。穴位2h組較模型2h組比較，陽性表達(dá)明顯增加

11、，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異(P＜0.05)；穴位2h組GLUT1陽性表達(dá)較非穴位2h組明顯增加(P＜0.05)，而非穴位2h組與模型2h組比較無顯著性差異。模型24h組與模型2h組比較，陽性表達(dá)明顯增加，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異(P＜0.01)；穴位24h組陽性表達(dá)要明顯多于模型24h組和非穴位24h，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異(P＜0.01)。上述結(jié)果表明，在缺血后2h～24h之間，GLUT1陽性表達(dá)增加；穴位針刺可以明顯增強(qiáng)大腦

12、皮質(zhì)GLUT1陽性表達(dá)，而非穴位組表達(dá)略有增加，但無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 7.各組大鼠缺血側(cè)皮質(zhì)區(qū)域GLUT3免疫陽性物MOD值明顯高于正常組(P＜0.05)。穴位2h組較模型2h組比較，陽性表達(dá)明顯增加，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異(P＜0.01)；穴位2h組GLUT3陽性表達(dá)較非穴位2h組明顯增加(P＜0.05)；非穴位2h組與模型2h組比較無顯著性差異(P＞0.05)。模型24h組與模型2h組比較，陽性表達(dá)明顯

13、增加，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異(P＜0.01)；穴位24h組陽性表達(dá)要明顯多于模型組和非穴位24h，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異(P＜0.05)。上述結(jié)果表明，在缺血后2h～24h之間，GLUT3陽性表達(dá)增加；穴位針刺可以明顯增強(qiáng)大腦皮質(zhì)GLUT3陽性表達(dá)，而非穴位組表達(dá)略有增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 8.各組大鼠缺血側(cè)皮質(zhì)HIF-1αmRNA表達(dá)明顯高于正常組(P＜0.01)。穴位2h組較模型2h組比較，基因表達(dá)明顯增加，經(jīng)

14、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異(P＜0.01)；穴位2h組基因表達(dá)較非穴位2h組明顯增加(P＜0.05)；非穴位2h組與模型2h組比較無顯著性差異(P＞0.05)。模型24h組與模型2h組比較，基因表達(dá)明顯增加，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異(P＜0.01)，穴位24h組基因表達(dá)要明顯多于模型組和非穴位24h，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異(P＜0.05)。上述結(jié)果表明，在缺血后2h～24h之間，HIF-1αmRNA表達(dá)增加；穴位針刺可以明顯增強(qiáng)大腦

15、皮質(zhì)HIF-1αmRNA表達(dá)，而非穴位組表達(dá)略有增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 9.各組大鼠缺血側(cè)皮質(zhì)EPOmRNA表達(dá)明顯高于正常組(P＜0.01)。穴位2h組較模型2h組比較，基因表達(dá)明顯增加，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異(P＜0.01)；穴位2h組基因表達(dá)較非穴位2h組明顯增加(P＜0.05)；非穴位2h組與模型2h組比較無顯著性差異(P＞0.05)。模型24h組與模型2h組比較，基因表達(dá)明顯增加，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

16、，有顯著性差異(P＜0.01)；穴位24h組基因表達(dá)要明顯多于模型組和非穴位24h，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，有顯著性差異(P＜0.05)。上述結(jié)果表明，在缺血后2h～24h之間，EPOmRNA表達(dá)增加；穴位針刺組可以明顯增強(qiáng)大腦皮質(zhì)EPOmRNA表達(dá)，而非穴位組表達(dá)略有增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.急性腦缺血后大鼠腦組織ATP生產(chǎn)及利用均減少，TAN及EC均降低，表明腦缺血后能量代謝障礙，而穴位針

17、刺可以顯著改善腦缺血大鼠腦組織能量代謝，發(fā)揮抗腦缺血損傷的作用。
　　 2.穴位針刺可以通過改善缺血腦組織的能量代謝，從而恢復(fù)Na+-K+-ATP與Ca2+-ATP酶的活性，從而可能通過減少胞內(nèi)Na+負(fù)荷，減輕Ca2+超載，維持了細(xì)胞內(nèi)外Na+、Ca2+穩(wěn)態(tài)，減輕細(xì)胞內(nèi)水腫，影響突觸興奮、傳導(dǎo)和遞質(zhì)釋放，抑制興奮性氨基酸等毒性物質(zhì)的釋放，達(dá)到腦保護(hù)作用。
　　 3.穴位針刺可以上調(diào)腦內(nèi)GLUT1和GLUT3的蛋白表達(dá)，增

18、加葡萄糖通過血腦屏障轉(zhuǎn)運(yùn)入腦，以提高葡萄糖腦轉(zhuǎn)運(yùn)效率，延續(xù)缺氧缺血情況下腦的能量供應(yīng)，延緩能量耗竭，對抗缺氧缺血的正向反應(yīng)，減輕缺血缺氧造成的腦損害。
　　 4.穴位針刺能誘導(dǎo)缺血區(qū)HIF-1αmRNA表達(dá)增加，從而增強(qiáng)EPOmRNA、GLUT1等靶基因的表達(dá)，發(fā)揮抗缺血損傷的作用。
　　 5.超早期針刺可通過對HIF-1α、GLUT1、GLUT3、EPO等的調(diào)節(jié)，有效的改善腦缺血后能量代謝，發(fā)揮抗腦缺血損傷的作用。