多柔比星對(duì)人宮頸癌細(xì)胞Ki-67基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響.pdf

1、目的：研究多柔比星對(duì)人宮頸癌細(xì)胞Ki-67基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響。
　　 方法：常規(guī)培養(yǎng)人宮頸癌細(xì)胞(Hela)，分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組根據(jù)加入濃度的不同分為A、B、C(85nM、170nM、340nM)三組。用Ki-67啟動(dòng)子質(zhì)粒pGLBK235(-223～+12)轉(zhuǎn)染細(xì)胞，多柔比星作用24小時(shí)后，雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)啟動(dòng)子活性的變化。
　　 多柔比星作用于Hela細(xì)胞，通過細(xì)胞免疫組化檢測(cè)多柔比星對(duì)Ki-6

2、7蛋白表達(dá)的影響，通過RT-PCR檢測(cè)多柔比星對(duì)Ki-67mRNA表達(dá)的影響。
　　 將五個(gè)重組質(zhì)粒pGLKAl(-198～-172)、pGLKA2（-170～-144）、pGLKA3（-117～-91）、pGLKA4(-63～-37)、pGLKA5(-14～+12)分別轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，多柔比星作用24小時(shí)后，雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)啟動(dòng)子活性的變化。
　　 結(jié)果：受到多柔比星作用的質(zhì)粒pGLBK235的啟動(dòng)子活

3、性隨藥物濃度的升高呈階梯性降低，其中藥物濃度為340nM時(shí)其活性最低。在多柔比星濃度分別為85nM、170nM、340nM時(shí)，pGLBK235在Hela細(xì)胞中的活性分別降至未受藥物作用的63.6％、47.2％、32.3％。受到多柔比星作用過的Hela細(xì)胞其Ki-67蛋白與mRNA的量均有減少（P＜0.05）。
　　 受到多柔比星作用的重組質(zhì)粒pGLKAl（-198～-172）、pGLKA2(-170～-144)、pGLKA3(-