Visfatin基因過表達對大鼠胰島素敏感性，F(xiàn)GF-21及脂代謝的影響.pdf

1、目的：構(gòu)建大鼠內(nèi)臟脂肪素(visfatin)基因pcDNA3.1(+)真核表達載體并轉(zhuǎn)入大鼠，觀察visfatin基因過表達對正常飲食及高脂飲食大鼠胰島素敏感性，F(xiàn)GF-21和糖脂代謝的影響。 方法： 1、構(gòu)建peDNA3.1(+)-visfatin真核表達質(zhì)粒。 2、將pcDNA3.1(+)-visfatin質(zhì)粒轉(zhuǎn)入正常飲食(NT組)及高脂飲食(HT組)大鼠，并以正常飲食pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒(NC組)為

2、對照，采用正糖-高胰島素鉗夾技術(shù)評價大鼠胰島素敏感性改變，同時測定血糖、血脂、血漿visfatin和FGF-21的變化。 3、用dot-blot方法測定肝臟、脂肪、肌肉組織IRS1的磷酸化水平。 4、用RT-RCR和Westemblot方法測定肝臟和脂肪組織脂代謝相關(guān)基因及蛋白水平的變化。 結(jié)果： 1、成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-visfatin。 2、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后3天，NT組和HT組

3、大鼠血漿visfatin水平均明顯升高(P＜0.01)，NT組血漿基礎(chǔ)胰島素水平明顯降低(P＜0.05)，葡萄糖輸注率較轉(zhuǎn)染前顯著升高(P＜0.01)。肝臟、脂肪、肌肉組織IRS1磷酸化的水平明顯增高(P＜0.05)，NT組和HT組大鼠肝臟PPARγ mRNA的表達均明顯升高(分別為P＜0.05和P＜0.01)，NT組大鼠脂肪組織PPARγ mRNA亦顯著升高(P＜0.01)，而HT組則僅有升高趨勢(P＞0.05)。 3、與質(zhì)粒

4、轉(zhuǎn)染前相比，各處理組大鼠血漿總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平明顯降低(P＜0.05)。SREBP2 mRNA表達均明顯高于對照組(P＜0.05)，NT組HMG CoA還原酶mRNA水平明顯高于NC組和HT組(P＜0.05)，NC組與HT組無明顯差異。 4、NT組大鼠脂肪組織ATGL mRNA及蛋白水平均明顯高于NC組和HT組(P＜0.05)，且HT組高于NC組，但無統(tǒng)計學意義。 5、與質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前比較

5、,NT組大鼠血漿FGF-21水平明顯下降(P＜0.05)，而HT組大鼠血漿FGF-21水平明顯升高(P＜0.05)；肝臟FGF-21 mRNA及蛋白水平變化與血漿FGF-21變化趨勢一致。 結(jié)論： 1、成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+).visfatin。 2、重組質(zhì)粒使血漿visfatin水平明顯升高，增強了大鼠胰島素敏感性，血漿總膽固醇水平明顯下降，并提高了脂肪組織ATGL mRNA及蛋白水平，同時對F