血必凈注射液對(duì)離體大鼠缺血再灌注心肌熱休克蛋白70表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 心肌缺血再灌注損傷是心外科手術(shù)常見(jiàn)的組織器官損傷，隨著器官移植等復(fù)雜手術(shù)的開(kāi)展，再灌注損傷已越來(lái)越受到人們的重視。但是，到目前為止，其確切的發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚，目前的研究主要集中在氧自由基形成、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、細(xì)胞凋亡、氧及能量利用障礙等方面。有研究表明，熱休克蛋白70(heat shock protein70 HSP70)能保護(hù)心肌收縮力，減少心肌缺血壞死范圍，并且有抗心律失常作用，通過(guò)誘導(dǎo)熱休克蛋白70的產(chǎn)生能夠明顯

2、減輕心肌缺血再灌注損傷。近年來(lái)，中藥在心肌缺血再灌注損傷的防治方面取得了一定進(jìn)展，而血必凈注射液就是從36組中藥處方中篩選而來(lái)，其有效成分主要有丹參、川芎嗪、阿魏酸、芍藥苷、紅花黃色素A等，具有抗細(xì)菌毒素、降低內(nèi)毒素水平、調(diào)節(jié)免疫及炎性介質(zhì)、改善微循環(huán)、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞等作用，并通過(guò)提高超氧化物歧化酶活性等途徑，保護(hù)和修復(fù)應(yīng)激狀態(tài)下受損的臟器。本研究采用離體心臟缺血再灌注損傷模型，排除了心臟在體時(shí)受神經(jīng)、體液等多種因素的影響，同時(shí)也排除

3、了藥物分布、代謝等因素的干擾，觀察血必凈注射液對(duì)心肌的直接作用，明確其對(duì)缺血再灌注損傷心肌是否具有保護(hù)作用，并探討其可能的機(jī)制，從而為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。 材料與方法： 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 選擇健康Wistar大鼠30只，雌雄不限，體重200±20g，隨機(jī)分成對(duì)照組(C組)和血必凈組(E組)，每組15只。 2、建立模型 大鼠腹腔注射10％水合氯醛麻醉后，腹腔注射肝素鈉抗凝，然后將大鼠仰臥位固

4、定于操作臺(tái)上，正中剪開(kāi)胸骨，小心迅速分離心臟，充分暴露心臟及大血管，在主動(dòng)脈根部稍往上將主動(dòng)脈和其他血管一起剪斷，立即將心臟置于盛有4℃冷K—H液的彎盤(pán)中，在液面下找出主動(dòng)脈斷端，將主動(dòng)脈插管插入，迅速接到Langendorff裝置上，灌注持續(xù)通有95％ O2和5％ CO2混合氣體的K—H液平衡15分鐘，保持溫度為37℃，灌注壓力為75 cmH2O。C組在K—H緩沖液灌注平衡15分鐘后，給予灌注ThomasⅡ停搏液使全心停搏30分鐘，然

5、后再重新灌注恒溫恒壓的K—H緩沖液使其復(fù)跳并繼續(xù)灌注120分鐘。E組在ThomasⅡ停搏液中加入血必凈注射液，其余處理均同C組。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中留取的冠脈回流液標(biāo)本立即置于—20℃冰箱保存，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)取部分心尖部組織，置于10％甲醛中固定，4℃冰箱保存，其余心肌置于—70℃冰箱保存。 3、檢測(cè)指標(biāo) 分別計(jì)量缺血前平衡灌注第10-15min、缺血再灌注后第25—30min、第85—90min的冠脈流出量，并取出其中3ml用全自動(dòng)

6、生化監(jiān)測(cè)儀檢測(cè)肌酸激酶的含量；用酶聯(lián)免疫法測(cè)心肌中熱休克蛋白70的含量；在光學(xué)顯微鏡下觀察心肌形態(tài)學(xué)變化。 4、數(shù)據(jù)分析 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示，組間比較采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析，兩兩比較用多重比較t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1、血必凈組酶聯(lián)免疫法檢測(cè)缺血再灌注120分鐘心肌組織熱休克蛋白70的含量與對(duì)照組比較明顯增多(P<

7、0.05)。 2、血必凈組與對(duì)照組在缺血前肌酸激酶含量差異無(wú)顯著性(P>0.05)；再灌注后相應(yīng)時(shí)間段的肌酸激酶含量血必凈組明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。 3、血必凈組與對(duì)照組在缺血前冠脈流量差異無(wú)顯著性(P>0.05)；再灌注后相應(yīng)時(shí)間段的冠脈流量血必凈組明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。 4、心肌結(jié)構(gòu)變化：血必凈組心肌細(xì)胞基本正常，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、聚集較少；對(duì)照組心肌組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、聚集明顯。 結(jié)論：