HMCD59糖基化前后的抗補體活性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構(gòu)建表達人突變CD59(HMCD59)蛋白的重組真核表達載體,建立HMCD59真核表達系統(tǒng),獲得表達HMCD59蛋白的中國倉鼠卵巢細胞(CHO)細胞株,深入研究HMCD59在糖尿病血管增殖癥中的作用.為闡明糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)病機理奠定基礎(chǔ).方法:分別構(gòu)建兩種含有HMCD59全長CDNA序列的重組pALTER質(zhì)粒,并與pcDNA3質(zhì)粒,按3:1比例混合后,運用脂質(zhì)體介導(dǎo)法共轉(zhuǎn)染CHO細胞(編號為HM5-CHO及HM6-CHO),用

2、新霉素類似物G41 8初步篩選出陽性克隆.應(yīng)用熒光抗體技術(shù)、流式細胞術(shù)、免疫酶標技術(shù)、western-blot技術(shù)進一步檢測HMCD59蛋白在真核細胞膜表面的表達;收集CHO細胞作為抗原,免疫家兔以獲得多克隆抗體,并通過BCECF染料釋放試驗檢測HMCD59蛋白糖化前后的抗補體活性.結(jié)論:建立了兩個表達HMCD59的真核表達系統(tǒng),獲得表達HMCD59的細胞株.獲得了抗CHO細胞的高效價多克隆抗體.初步研究了HMCD59的活性,發(fā)現(xiàn)HMC

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