扁桃體、腺樣體組織中Toll樣受體2和9 mRNA的含量測定及意義.pdf

1、Toll樣受體是一個(gè)介導(dǎo)天然免疫的古老家族。該受體的發(fā)現(xiàn)最早緣于對果蠅Toll(dToll)蛋白的研究，所以稱為Toll樣受體(Toll-Like Receptors，TLRs)。Toll樣受體能識(shí)別病原體所攜帶的高度保守的病原體相關(guān)分子模式(Pathogen Associated Molecular Pattern，PAMP)，在人類先天性免疫反應(yīng)以及特異性免疫應(yīng)答中均具有重要作用。到目前為止，已發(fā)現(xiàn)的TLRs共有11種，分別為TLR

2、1～TLR11，各有不同的配體識(shí)別范圍和機(jī)制，其中TLR2和TLR9識(shí)別的配體涵蓋了自然界絕大多數(shù)對人體致病的微生物類別。 扁桃體和腺樣體是構(gòu)成人體Waldeyer咽淋巴內(nèi)環(huán)的主要淋巴器官，具有細(xì)胞免疫和體液免疫的雙重功能。它們位于呼吸道和消化道的入口，頻繁接觸外界各種病原微生物，可以說是病原微生物感染機(jī)會(huì)最多的器官。反復(fù)感染造成的慢性扁桃體炎伴腺樣體肥大或腺樣體炎已給兒童及青少年患者帶來一系列問題，如造成睡眠呼吸暫停低通氣綜合

3、征，使鼻竇炎或分泌性中耳炎遷延不愈，甚至引起風(fēng)濕熱、腎小球腎炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等等。有時(shí)不得不考慮切除手術(shù)。但是，手術(shù)切除又使兒童及青少年患者失去了上呼吸道和消化道的重要免疫器官。手術(shù)適應(yīng)癥的把握一直存在爭議。 本文應(yīng)用SYBR Green染料熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)檢測TLR2和TLR9在慢性扁桃體炎合并腺樣體肥大或腺樣體炎患者的手術(shù)切除組織中的表達(dá)情況。以分析扁桃體和腺樣體在抗病原微生物感染的天然免疫反應(yīng)中的作用。

4、 材料和方法 1 組織標(biāo)本收集 2007年5月至2008年2月期間在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院耳鼻咽喉科單個(gè)醫(yī)療組住院手術(shù)的19歲以下的慢性扁桃體炎合并腺樣體肥大或腺樣體炎病例的切除組織標(biāo)本。共30例，其中男性23例，女性7例。年齡4-19歲，中位年齡為7歲。所有病例均為初次手術(shù)患者，術(shù)前3周均未接受抗生素治療。手術(shù)名稱為扁桃體剝離和視屏內(nèi)鏡下腺樣體切除術(shù)，均在氣管插管靜脈復(fù)合麻醉下進(jìn)行。從手術(shù)切除標(biāo)本中切取小塊扁

5、桃體組織和腺樣體組織，置入預(yù)先高壓滅菌的的凍存管中，立即置于液氮中并保存于-80℃冰箱。 2 方法 引用文獻(xiàn)進(jìn)行TLR2、TLR9的引物設(shè)計(jì)[1]。設(shè)計(jì)引物序列經(jīng)http：//www．ncbi．nlm．nih．gov/BLAST/進(jìn)行同源性分析，分析結(jié)果示引物特異性好，無明顯非特異性擴(kuò)增。 所有組織樣本以Trizol法提取組織中總RNA，常規(guī)方法逆轉(zhuǎn)錄，合成cDNA，將組織樣本eDNA在7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR

6、檢測系統(tǒng)上以最佳PCR條件進(jìn)行TLR2和TLR9的檢測，同時(shí)以GAPDH為內(nèi)參照。 3 數(shù)據(jù)分析 以相對定量法計(jì)算TLR2及TLR9的mRNA含量，TLR2 mRNA的相對含量=2-△CT(△CT=TLR2的CT值-GAPDH的CT值)，TLR9 mRNA的相對含量=2-△CT(△CT=TLR9的CT值-GAPDH的CT值)。所得數(shù)據(jù)以SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理，經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布，故結(jié)果用中位數(shù)(四

7、分位數(shù)間距)，即M(QR)表示。以Wileoxon秩和檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。 結(jié)果 30例扁桃體組織標(biāo)本TLR2 mRNA相對含量中位數(shù)為0.427，其四分位數(shù)間距為0.777；腺樣體組織的TLR2 mRNA相對含量中位數(shù)為0.009，其四分位數(shù)間距為0.252，見表1?？梢姳馓殷w組織標(biāo)本的TLR2 mRNA相對含量較腺樣體組織為高，兩者間的差異經(jīng)Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著性意義(P<0.01)30例扁桃

8、體組織標(biāo)本TLR9 mRNA相對含量中位數(shù)為0.216，其四分位數(shù)間距為0.532；腺樣體組織的TLR9 mRNA相對含量中位數(shù)為0.005，其四分位數(shù)間距為0.173，見表2?？梢姳馓殷w組織標(biāo)本的TLR9 mRNA相對含量較腺樣體組織為高，兩者間的差異經(jīng)Wileoxon秩和檢驗(yàn)，也有統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著性意義(P<0.01）。 結(jié)論 1.扁桃體及腺樣體組織中均有TLR2 mRNA、TLR9 mRNA的表達(dá)，提示感染因素均是慢性