水楊酸-外毛細(xì)胞馬達(dá)蛋白prestin在小鼠耳蝸聲損傷中的作用研究.pdf

1、第一部分：小鼠畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射特性研究 目的：研究小鼠畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射特性。 方法：出生18天到30天的雄性C57BL／6小鼠，以畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射輸入一輸出曲線為表達(dá)方式，記錄f2=5kHz、6kHz、7kHz和8kHz四個(gè)頻率時(shí)，DPOAE強(qiáng)度為0dBSPL時(shí)所給L。的強(qiáng)度；LJL2=55／45dB、65／55dB、75／65dB時(shí)，對(duì)應(yīng)DPOAE強(qiáng)度；及DPOAE增長(zhǎng)斜率。 結(jié)果：當(dāng)Ll／L2=75／65dB

2、時(shí)，四個(gè)頻率DPOAE強(qiáng)度分別為為O．00±5dB、5．35±5dB、6．34±5dB和16．12±4dB；當(dāng)Li／L2=65／55dB時(shí)，為一7．35±4dB、2．80±4dB、3．06±3dB和7．17±4dB；當(dāng)Li／L2=55／45dB時(shí)，為一10．39±2dB、一0．66±4dB、一1．88±4dB和一1．99±5dB。當(dāng)DPOAE強(qiáng)度為OdBSPL時(shí)，四個(gè)頻率所對(duì)應(yīng)的L。的強(qiáng)度分別為3．54±5dB、57．31±8dB、58

3、．89±7dB和57．04±4dB。四個(gè)頻率的DPOAE增長(zhǎng)斜率分別為O．88±0．3、O．36±O．2、O．50±O．2和O．93±O．2。 結(jié)論：當(dāng)原始音強(qiáng)度固定時(shí)，隨著所給原始音頻率的增加，引出的頻率為2f1-f2的DPOAE的強(qiáng)度也逐漸增強(qiáng)；當(dāng)f1、f2固定時(shí)，2f1-f2的DPOAE的強(qiáng)度隨著兩個(gè)原始音強(qiáng)度的增加而增加。頻率越高，2f1-f2DPOAE幅值隨原始音強(qiáng)度增大而線性增長(zhǎng)的速度越快。I／O曲線存在多樣性，簡(jiǎn)單

4、采用單一斜率并不能反映耳蝸功能。 第二部分：水楊酸鈉對(duì)小鼠畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射的影響 目的：探討水楊酸鈉腹腔注射對(duì)小鼠畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射的影響及其特征。 方法：測(cè)試小鼠用藥前畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射的基線水平；隨后按400mg／kg腹腔注射水楊酸鈉；分別在腹腔注射后三小時(shí)和三天再次檢測(cè)小鼠畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射。 結(jié)果：用藥后三小時(shí)，小鼠f2為5、6、7和8kHz的2f1-f2DPOAE閾值上升了12～15dBSPL，而DP

5、OAE的幅值則下降了3～9dBSPL；在用藥后三天，小鼠DPOAE的閾值和幅值均恢復(fù)到用藥前基線水平。用藥后，原始音為60dBSPL時(shí)所誘發(fā)的各頻率DPOAE檢出率明顯低于原始音為70dBSPL的檢出率，且頻率越低檢出率越低。用藥前后小鼠DPOAE的潛伏期無(wú)顯著變化。 結(jié)論：水楊酸鈉可逆性地引起小鼠DPOAE閾值升高和幅值降低，這種變化在低強(qiáng)度原始音誘發(fā)的DPOAE較明顯，而對(duì)潛伏期無(wú)明顯影響。 第三部分：水楊酸對(duì)C57

6、BL／6小鼠耳蝸噪聲損傷的作用 目的：探討水楊酸對(duì)prestin正常表達(dá)小鼠耳蝸噪聲損傷作用。 方法：以出生18天～30天的雄性C57BL／6小鼠為研究對(duì)象，分為三組(水楊酸+噪聲；生理鹽水+噪聲；單純水楊酸)，給予中心頻率為8kHz強(qiáng)度為¨0dBSPL的1／3倍頻程噪聲持續(xù)暴露3小時(shí)。用聽誘發(fā)腦干反應(yīng)和畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射檢測(cè)來(lái)觀察有、無(wú)水楊酸干預(yù)小鼠耳蝸聽力學(xué)上噪聲損傷的程度。掃描和透射電鏡觀察兩組小鼠耳蝸形態(tài)學(xué)上噪聲損

7、傷程度。熒光定量PCR記錄兩組小鼠prestinmRNA總量的變化情況。 結(jié)果：水楊酸提前干預(yù)使prestin正常表達(dá)小鼠耳蝸噪聲損傷后c¨ck音誘發(fā)ABR閾移在噪聲暴露后第一天減少27dBSPL，第十天減少17dBSPL；5kHz、6kHz和7kHz三個(gè)頻率0dB強(qiáng)度的DPOAE引出率在噪聲暴露后第一和第十天均升高。水楊酸提前干預(yù)使耳蝸噪聲損傷后掃描電鏡上外毛細(xì)胞纖毛倒伏、折斷、紊亂等情況減輕；透射電鏡上外毛細(xì)胞及支持細(xì)胞超微

8、結(jié)果變化減輕。熒光定量PCR表明，噪聲暴露后一天，兩組小鼠外毛細(xì)胞prestinmRNA總量無(wú)顯著改變；但在噪聲暴露后十天，水楊酸組小鼠prestinmRNA總量較生理鹽水組及噪聲暴露前均升高。 結(jié)論：水楊酸提前干預(yù)可以顯著減輕prestin正常表達(dá)小鼠耳蝸噪聲損傷；水楊酸干預(yù)使外毛細(xì)胞prestinmRNA總量升高。 第四部分：水楊酸對(duì)prestin無(wú)表達(dá)小鼠耳蝸噪聲損傷的作用 目的：探討水楊酸對(duì)prestin

9、無(wú)表達(dá)小鼠耳蝸噪聲損傷作用。 方法：以出生20天～28天的prestin無(wú)表達(dá)小鼠為研究對(duì)象，分為三組(水楊酸+噪聲；生理鹽水+噪聲；對(duì)照組)，給予中心頻率為8kHz強(qiáng)度為110dBSPL的1／3倍頻程噪聲持續(xù)暴露3小時(shí)。用聽誘發(fā)腦干反應(yīng)檢測(cè)來(lái)觀察有、無(wú)水楊酸干預(yù)小鼠耳蝸在聽力學(xué)上噪聲損傷的程度。掃描和透射電鏡觀察兩組小鼠耳蝸在形態(tài)學(xué)上噪聲損傷程度。 結(jié)果：所給噪聲使prestin無(wú)表達(dá)小鼠在噪聲暴露后第一天click音

10、和8kHz純音誘發(fā)ABR閾移上升27dB和34dB；在噪聲暴露后八天，click音和8kHz純音誘發(fā)的ABR閾移分別上升了29dB和35dB。但是，無(wú)論是否有水楊酸提前干預(yù)，ABR閾移無(wú)顯著差異。在噪聲暴露后第一天，兩組小鼠的掃描和透射電鏡均有噪聲損傷表現(xiàn)，但沒(méi)有明顯輕重之分；但在噪聲暴露后第八天，雖然掃描電鏡仍然不能區(qū)分輕重，透射電鏡卻發(fā)現(xiàn)無(wú)水楊酸干預(yù)組外毛細(xì)胞胞內(nèi)容物丟失更為嚴(yán)重。 結(jié)論：噪聲暴露前給予水楊酸干預(yù)對(duì)prest