雞IGF-Ⅰ對成骨細胞功能的影響及其基因多態(tài)性與蛋雞骨代謝相關(guān)性的研究.pdf

1、　　籠養(yǎng)蛋雞骨質(zhì)疏松癥是以全身漸進性結(jié)構(gòu)骨丟失及骨脆性增加和易于發(fā)生骨折為特征的一種嚴重骨骼性疾病?；\養(yǎng)、營養(yǎng)、遺傳、內(nèi)分泌等對本病的發(fā)生均有一定的作用，但其確切作用機制仍不明了。鑒于IGF-Ⅰ是骨骼中最豐富的生長因子、并對骨重建動態(tài)平衡起著重要的調(diào)節(jié)作用，本文從IGF-Ⅰ的成骨細胞生物學(xué)功能及IGF-Ⅰ遺傳多態(tài)性兩個方面展開研究，旨在部分闡明籠養(yǎng)蛋雞骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生機制。 1、雞胰島素樣生長因子Ⅰ的克隆及其在大腸桿菌中的表達

2、　　結(jié)果表明，擴增片段為含有信號肽的雞IGF-Ⅰ完整基因，與GenBank上登錄的雞IGF-Ⅰ(M-32791)同源性為100﹪。在此基礎(chǔ)上，亞克隆雞IGF-Ⅰ成熟蛋白編碼基因，然后構(gòu)建了雞IGF-Ⅰ原核單純表達載體pRLC-IGF-Ⅰ，再通過溫度誘導(dǎo)實現(xiàn)了重組雞IGF-Ⅰ成熟蛋白的表達，經(jīng)Tricine-SDS-PAGE電泳分析，原核表達產(chǎn)物為7.6KD的重組蛋白，薄層掃描顯示IGF-Ⅰ占菌體總蛋白的23﹪。重組雞IGF-Ⅰ的獲得為進

3、一步研究其生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。 2、雞IGF-1重組蛋白的變、復(fù)性研究及生物學(xué)活性測定　　結(jié)果表明：重組雞IGF-Ⅰ在100-800ng/mL范圍內(nèi)，顯著促進NIH3T3和雞胚成纖維細胞的增殖作用。結(jié)論：重組IGF-Ⅰ具有較高的生物學(xué)活性。 3、雞胚額骨成骨細胞分離培養(yǎng)及重組雞IGF-Ⅰ對其促增殖作用的研究　　在建立雞胚額骨成骨細胞培養(yǎng)方法的基礎(chǔ)上，體外直接研究重組雞IGF-Ⅰ對蛋雞成骨細胞增殖和分化功能的影響。

4、顯著促進雞胚額骨成骨細胞的增殖和分化，并呈劑量依賴關(guān)系。 4、rcIGF-Ⅰ對雞胚額骨成骨細胞骨相關(guān)基因mRNA表達的影響　　rcIGF-Ⅰ可以在轉(zhuǎn)錄水平上增加雞胚額骨成骨細胞骨相關(guān)基因的表達，并呈明顯的劑量依賴關(guān)系，提示：IGF-Ⅰ促進成骨細胞的增殖、分化的作用可能是通過增加骨相關(guān)基因的表達水平來實現(xiàn)的。 5、雞胰島素樣生長因子Ⅰ基因多態(tài)性與體重、骨代謝相關(guān)性的研究　　研究表明：whiteleghorn籠養(yǎng)蛋雞