人乳腺癌細(xì)胞株對(duì)正常內(nèi)皮細(xì)胞作用的研究及CA15-3光學(xué)蛋白質(zhì)芯片的建立和應(yīng)用.pdf

1、本研究圍繞著當(dāng)前微循環(huán)學(xué)科兩個(gè)重點(diǎn):腫瘤的血管新生,及蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)行了兩部分工作.隨著第一部分工作的深入有可能發(fā)現(xiàn)腫瘤血管新生中新的調(diào)控蛋白質(zhì),第二部分內(nèi)容可為第一部分內(nèi)容提供一個(gè)新的實(shí)用技術(shù)平臺(tái).本研究的第一部分工作研究目的在于通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)探討腫瘤細(xì)胞對(duì)正常內(nèi)皮細(xì)胞有無(wú)誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化作用,及經(jīng)共培養(yǎng)后的內(nèi)皮細(xì)胞有何細(xì)胞性質(zhì)改變.本研究采用帶微磁珠的CD31單克隆抗體對(duì)采自正常產(chǎn)婦分娩的嬰兒臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行分離和純化;分別了建立經(jīng)純化

2、的內(nèi)皮細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、MDA-MB-231共培養(yǎng)系統(tǒng);以光學(xué)顯微鏡對(duì)共培養(yǎng)前后的內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行了形態(tài)學(xué)觀察、和以透射電子顯微鏡進(jìn)行了細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察以及以RT-PCR方法對(duì)共培養(yǎng)前后的內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行了5種基因表達(dá)分析.從本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出,與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后的內(nèi)皮細(xì)胞與未經(jīng)共培養(yǎng)的正常內(nèi)皮細(xì)胞間有不同,乳腺癌細(xì)胞株對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞有轉(zhuǎn)化作用.細(xì)胞行為的調(diào)控最終是由細(xì)胞內(nèi)抑或細(xì)胞間的基因表達(dá)的蛋白質(zhì)產(chǎn)物決定的,疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)

3、歸也是通過(guò)關(guān)鍵性的調(diào)控蛋白實(shí)現(xiàn)的.由此,在世紀(jì)之交,蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)繼基因組學(xué)之后,成為當(dāng)前人類(lèi)醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn).隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的研究,相關(guān)的蛋白質(zhì)研究技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生,蛋白質(zhì)芯片技術(shù)就是近年來(lái)發(fā)展較快的一種用于蛋白質(zhì)檢測(cè)和分析的技術(shù)平臺(tái).目前,已有多種類(lèi)型的蛋白質(zhì)芯片,其中光學(xué)蛋白質(zhì)芯片是利用橢偏光光學(xué)成像技術(shù)并融合了微流體力學(xué)和微反應(yīng)器等技術(shù)的,一種無(wú)需標(biāo)記的蛋白質(zhì)檢測(cè)、分析的技術(shù)平臺(tái).本研究利用光學(xué)蛋白質(zhì)芯片技術(shù)平臺(tái),

4、建立了乳腺癌標(biāo)記物CA15-3檢測(cè)用蛋白質(zhì)光學(xué)芯片,與目前臨床乳腺癌標(biāo)記物CA15-3金標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法"電化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)"為對(duì)照方法,采用雙盲法對(duì)臨床確診的60例乳腺癌及其它乳腺疾病血清標(biāo)本的CA15-3進(jìn)行了檢測(cè)研究,采用試驗(yàn)特性曲線ROC(receiver-operating characteristic)進(jìn)行了光學(xué)蛋白質(zhì)芯片檢測(cè)與對(duì)照金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法學(xué)比較分析.并比較分析了光學(xué)蛋白質(zhì)芯片方法與電化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)CA15-3檢測(cè)結(jié)果.