胰高糖素樣肽2對腸道缺血再灌注小鼠腸粘膜免疫的影響.pdf

1、缺血再灌注損傷常常會損害腸屏障功能,產(chǎn)生免疫抑制和增加腸道細(xì)菌移位.胰高糖素樣肽2(GLP-2)是新近發(fā)現(xiàn)的腸道特異性生長因子.近年來的研究發(fā)現(xiàn),使用GLP-2治療,可以增加嚙齒類動物小腸粘膜的增生,并能防止和治療休克、放療、化療、腸外營養(yǎng)等誘發(fā)的消化道損傷和免疫功能損害.該研究通過建立小鼠腸道缺血再灌注模型,以探討GLP-2對維持正常的腸屏障功能、減輕免疫抑制和減少腸道細(xì)菌移位的影響.材料和方法:實(shí)驗(yàn)1:將30只雄性ICR小鼠(30~

2、40g)隨機(jī)分成正常對照組(N組)、實(shí)驗(yàn)對照組(C組)和GLP-2預(yù)處理組(P組).所有小鼠均予普食,P組小鼠給予10 μ g/ml的GLP-2 PBS溶液,0.5ml,皮下注射,一日兩次,連續(xù)5天.N組、C組小鼠給予0.01mmol/L PBS液,0.5ml,皮下注射,一日兩次,連續(xù)5天.C組和P組小鼠均在麻醉后剖腹,分離出腸系膜上動脈,以絲線結(jié)扎20分鐘后松開,形成腸道的缺血及再灌注狀態(tài).24小時(shí)后統(tǒng)計(jì)各組死亡率.所有小鼠均在24小

3、時(shí)后處死,在無菌條件下,分別取肝、脾、腸系膜淋巴結(jié)和肺組織作細(xì)菌培養(yǎng)和菌種鑒定,鱟試驗(yàn)合成基質(zhì)偶氮顯色法檢測血漿內(nèi)毒素,二抗夾心ELISA法測量肺和全小腸灌洗液sIgA含量,分別切取近端、遠(yuǎn)端空腸和末段回腸作形態(tài)學(xué)和免疫組化檢測腸粘膜淋巴細(xì)胞的分布和數(shù)量,ELISA Kit試劑盒測量腸粘膜細(xì)胞因子IL-2、4、6、10和IFN-γ的變化.實(shí)驗(yàn)2:將70只雄性ICR小鼠(30~40g)隨機(jī)分成正常對照組(N組)、實(shí)驗(yàn)對照組(C組)和GLP

4、-2治療組(T組).除N組外的小鼠均制成腸道缺血再灌注模型.所有小鼠均予普食.N組和C組給予皮下注射0.01mmol/L PBS液,0.5ml,一日兩次,直至處死.T組給予皮下注射10μ g/ml的GLP-2 PBS溶液,0.5ml,一日兩次,直至處死.統(tǒng)計(jì)各組死亡率.在設(shè)定時(shí)間點(diǎn)處死動物,采集標(biāo)本,檢測項(xiàng)目同實(shí)驗(yàn)1.結(jié)論:缺血再灌注后腸粘膜損傷和萎縮、粘膜免疫受到抑制,造成細(xì)菌、內(nèi)毒素移位,死亡率增加.應(yīng)用外源性GLP-2可以明顯地增