加味四逆散對(duì)肝硬化大鼠胃腸動(dòng)力變化干預(yù)作用實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 研究加味四逆散對(duì)肝硬化大鼠胃腸動(dòng)力障礙防治作用，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探討。通過加味四逆散對(duì)肝硬化大鼠一般情況、肝功能、肝臟形態(tài)的療效觀察，對(duì)肝硬化大鼠胃電圖異常的防治作用，從胃腸肽角度探討實(shí)驗(yàn)性肝硬化大鼠胃腸動(dòng)力紊亂的機(jī)制以及加味四逆散防治作用。以Icc(Interstitial cells of Cajal，cajal間質(zhì)細(xì)胞)表達(dá)c—kit(Ⅲ型跨膜蛋白酪氨酸激酶生長因子受體蛋白)為切入點(diǎn)，研究肝硬化大鼠的c—kit表

2、達(dá)量變化，以及加味四逆散對(duì)其的影響，以GASR(胃泌素受體)、VIPR2(VIP-2 receptor，血管活性腸肽Ⅱ型受體)為代表，在胃腸組織對(duì)胃腸肽受體水平測(cè)定探討肝硬化大鼠胃腸動(dòng)力信號(hào)接收系統(tǒng)變化，探討加味四逆散治療機(jī)理。 方法： Wister雄性大鼠48只被隨機(jī)分為4組，每組12只，除空白組外，其他三組均給予大鼠皮下注射40％CCL4花生油溶液2.5ml/kg，每周2次造模，連續(xù)造模11周。第八周造模同時(shí)中藥組

3、用“加味四逆散”煎劑灌胃治療，西藥組以西沙比利灌胃治療，空白、模型組則給予等體積生理鹽水灌胃。于11周末檢測(cè)大鼠胃電圖、肝功能、肝組織病理；放免法測(cè)定血清、胃、小腸的MTL(Motilin，胃動(dòng)素)、GAS(gastrin，胃泌素)、VIP(Vosoactiveintestinepoly Peptide，血管活性腸肽)、SS(somatostatins，生長抑素)含量變化。免疫組化法測(cè)定胃組織GAS、SS，小腸組織MTL、VIP含量變化

4、；免疫組化法測(cè)定胃組織c—kit陽性表達(dá)量變化； RT—PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng))法測(cè)定胃組織GASR、空腸組織VIPR2兩種受體mRNA的表達(dá)及定量分析，檢測(cè)完畢后對(duì)空白組、模型組、西藥組及中藥組相應(yīng)數(shù)據(jù)分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： (1)模型組一般情況、肝功能、肝臟形態(tài)與空白組相比均有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.0

5、5)，加味四逆散組與模型組比較肝功能TP(total protein，總蛋白)、ALB(albumin，白蛋白)含量明顯升高，ALT(alaninetransaminase，谷丙轉(zhuǎn)氨酶)、AST(aspartate transaminase天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶)含量明顯下降，均有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)；肝組織病理改變明顯減輕；“加味四逆散”組與西藥組比較：肝功能TP、ALB含量明顯升高，ALT、AST含量明顯下降，均有顯著性

6、差異(P＜0.01、P＜0.01或P＜0.05)，肝組織病理改變減輕。 (2)模型組慢波節(jié)律、主功率、主頻率、快波頻率明顯低于正常組(P＜0.05、P＜0.01)，胃電慢波振幅無明顯改變；中藥組慢波節(jié)律、主頻率、主功率、快波頻率與模型組比較明顯增強(qiáng)(P＜0.05、P＜0.01)，胃電慢波振幅無明顯改變，胃電波接近正常對(duì)照水平，與西藥組比較慢波節(jié)律及快波頻率均有明顯差異(P＜0.05、P＜0.01)；西藥組主頻率、快波頻率與模型組

7、比較明顯增強(qiáng)(P＜0.05)，主功率、慢波節(jié)律與模型組比較無明顯差異(P＞0.05)。 (3)放免法測(cè)定，模型組與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠血漿及胃腸組織中GAS、SS、MTL、VIP的含量均明顯增加(P＜0.01或P＜0.05)；中藥組與模型組比較，中藥組大鼠血漿及胃組織中GAS、SS、MTL、VIP的含量明顯降低(P＜0.01或P＜0.05)，腸組織中MTL、SS、VIP的含量明顯降低(P＜0.01或P＜0.05)，腸組織中

8、GAS的含量無明顯降低(P＞0.05)。中藥組與西藥組比較血漿MTL，升高明顯(P＜0.05)，VIP明顯降低(P＜0.01)，GAS、SS無明顯差異(P＞0.05)，胃組織中GAS含量明顯升高(P＜0.01)，VIP的含量明顯降低(P＜0.05)，MTL、SS的含量無明顯差距(P＞0.05)，腸組織中GAS的含量明顯升高(P＜0.05)，SS的含量明顯降低(P＜0.05)MTL、VIP的含量無明顯差異(P＞0.05)但有不同程度升高或

9、降低；西藥組與模型組比較大鼠血漿MTL、VIP、SS的含量明顯降低(P＜0.01或P＜0.05)，GAS接近(P＞0.05)，胃組織中MTL、GAS、SS、VIP明顯降低(P＜0.05)，腸組織中MTL、GAS、VIP明顯降低(P＜0.05)，SS接近(P＞0.05)。免疫組化法測(cè)定，模型組與空白組比較大鼠胃腸組織中GAS、SS、MTL、VIP的含量明顯升高(P＜0.05)。中藥組與模型組比較大鼠胃腸組織中GAS、SS、MTL、VIP的

10、含量明顯降低(P＜0.05)，與西藥組比較胃腸組織中GAS、SS、MTL、VIP的含量接近，無明顯差異(P＜0.05)；西藥組與模型組比較大鼠胃腸組織中GAS、MTL，VIP的含量明顯降低(P＜0.05)，SS接近。 (4)各組胃組織c—kit均有陽性表達(dá)，肝硬化組與對(duì)照組相比c—kit量明顯降低(P＜0.05)。中藥組的陽性表達(dá)量與肝硬化組比較明顯升高(P＜0.05)，接近空白組，與西藥組比較明顯升高(P＜0.05)。西藥組與

11、模型組比較陽性表達(dá)量無顯著差異(P＞0.05)。 (5)各組在胃組織中GAS受體mRNA均有表達(dá)，肝硬化組在胃組織GASRmRNA表達(dá)與空白組相比含量明星降低(P＜0.01)；中藥組與肝硬化組比較含量明顯升高(P＜0.01)與西藥組比較明顯升高(P＜0.05)，。在空腸各組VIPR2受體mRNA均有表達(dá)，肝硬化組與空白組相比VIPR2mRNA含量升高(P＜0.01)，中藥組與組肝硬化VIPR2mRNA含量明顯降低(P＜0.01)

12、，與西藥組比較明顯降低(P＜0.05)。 結(jié)論： 本實(shí)驗(yàn)得出以下結(jié)論，(1)加味四逆散：顯著提高TP、ALB含量，降低ALT、AST含量。因此，加味四逆散能有效地保護(hù)肝細(xì)胞，恢復(fù)肝功能，具有較好的防治實(shí)驗(yàn)大鼠肝硬化病理改變的作用。(2)加味四逆散能夠明顯改善實(shí)驗(yàn)性肝硬化大鼠的胃電波異常，從而有明顯促胃動(dòng)力作用。(3)肝硬化大鼠血漿、胃、小腸不同部位的GAS、SS、MTL、VIP的變化方向基本一致，但程度不一。可能與肝硬化