利用bcl-2基因治療慢性充血性心力衰竭的實驗研究.pdf

1、近年來人們逐漸認識到心肌細胞的反復丟失是心力衰竭進程中最為重要的因素。而心肌細胞凋亡可能是其反復丟失的根源所在。同時因凋亡所致的心肌細胞死亡與病理性的心室重構密切相關。因此對由于凋亡所致的心肌細胞數量減少的研究，逐漸成為心力衰竭研究的熱點。 細胞凋亡是受基因編碼調控的。許多基因參與凋亡的調控，目前研究表明，Bcl-2基因直接抑制細胞凋亡。鑒于此，運用基因載體技術、基因轉移技術將bcl-2基因導入衰竭的心肌，可直接抑制心肌細胞凋亡

2、，減少心肌細胞丟失，提高心臟功能。 [方法]本課題根據文獻采用腹主動脈結扎法制備了慢性心衰模型，將模型動物分為對照組及基因藥物心肌注射后1d、3d、7d組?；蛩幬镒⑸浣M用構建的In-vivo-jetPEI-pCAGGS-GFP-bcl2DNA進行心肌轉染，對照組注射等量的Invivo-jetPEI。采用激光共聚焦顯微鏡及抗體染色法觀察心肌切片中GFP、Cy3熒光的表達，以二步免疫組化法檢測Bcl-2基因蛋白的表達變化；以缺口末

3、端標記法(TUNEL)標記凋亡細胞；用多道生理記錄儀檢測轉染動物的心功能包括：心率(HR)、中心靜脈壓(CVP)、心輸出量(CO)、左室舒張末壓(LVEDP)等。 [結果] 1.帶有GFP報告基因的Bcl-2基因藥物，注射慢性心衰大鼠的心肌后，1天后取材，用激光共聚焦顯微鏡觀察，能明顯的看到GFP的表達，用Cy3二抗也能檢測到GFP較高表達的豐度。 2.慢性心衰模型動物心肌組織細胞凋亡明顯增多，基因藥物心肌注射1

4、天、3天、7天各組與模型組相比，慢性心衰大鼠的凋亡發(fā)生率顯著降低。 3.慢性心衰模型動物Bcl-2蛋白表達明顯降低，基因藥物心肌注射組1天、3天、7天組的Bcl-2蛋白表達與模型組相比有所增高。 4.基因藥物心肌注射組心臟功能有增高趨勢。 [結論] 1.慢性心衰模型動物心肌組織細胞凋亡明顯增多，同時心功能下降。 2.慢性心衰模型動物Bcl-2蛋白表達明顯降低。 3.GFP、Cy3熒光表達結